Anticorpo monoclonale di coniglio anti-eIF3B per WB, IF/ICC, ELISA - P55884

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di eIF3B

• Il fattore 3 di inizio della traduzione eucariotica, subunità B (eIF3B), noto anche come PRT1, EIF3S9, eIF3-p110 o eIF3-p116, è un componente centrale del complesso del fattore 3 di inizio della traduzione eucariotica (eIF-3), che svolge un ruolo fondamentale nella sintesi proteica indirizzando e avviando la traduzione di un sottogruppo di mRNA coinvolti nella proliferazione cellulare, nel ciclo cellulare, nella differenziazione e nell'apoptosi.
• Il complesso eIF-3 è necessario per diverse fasi dell'inizio della traduzione: si associa alla subunità ribosomiale 40S per facilitare il reclutamento dei fattori di inizio, stimola il reclutamento dell'mRNA e la scansione per il riconoscimento dell'AUG ed è essenziale per la dissociazione e il riciclo dei complessi ribosomiali post-terminazione, prevenendo l'associazione prematura delle subunità. Riferimenti correlati: PMID:17581632 PMID:9388245
• eIF3B è una subunità chiave legante l'RNA, che consente al complesso eIF-3 di regolare specificamente la traduzione degli mRNA correlati alla proliferazione cellulare attraverso diverse modalità di legame alle strutture a forcina dell'RNA, agendo come attivatore o repressore della traduzione. Riferimenti correlati: PMID:25849773
• Nel contesto dell'infezione da calicivirus felino (FCV), eIF3B partecipa all'evento ribosomiale di terminazione e riinizio che dirige la traduzione della proteina virale VP2, evidenziando il suo ruolo nelle interazioni ospite-patogeno. Riferimenti correlati: PMID:18056426
• A livello subcellulare, eIF3B è prevalentemente citoplasmatica e può localizzarsi nei granuli da stress, organelli privi di membrana che si formano in condizioni di stress cellulare per immagazzinare temporaneamente gli mRNA e regolare la traduzione.
• eIF3B è soggetta a modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione e fosforilazione, che possono modulare la sua attività e le sue interazioni all'interno del macchinario di inizio della traduzione.
• Dal punto di vista strutturale, eIF3B contiene domini con ripetizioni WD e appartiene alla famiglia delle proteine con ripetizioni WD, note per facilitare le interazioni proteina-proteina e formare strutture a forma di elica, in linea con il suo ruolo nell'assemblaggio del complesso eIF-3 multisubunità.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per le applicazioni Western blot, si prevede una banda predominante a circa 93 kDa, corrispondente a eIF3B a lunghezza intera; si consiglia di utilizzare un controllo di caricamento e di normalizzare i segnali tra i campioni.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), eIF3B presenta una distribuzione citoplasmatica; è necessaria la permeabilizzazione con detergenti come Triton X-100 o saponina e, in condizioni di stress cellulare, la colorazione può localizzarsi nei granuli da stress.
• L'anticorpo mostra reattività crociata con gli omologhi di topo e ratto; tuttavia, si raccomanda di convalidare la specificità del legame e le prestazioni in queste specie utilizzando controlli positivi e negativi appropriati.
• Per l'ELISA, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale; considerare un formato ELISA diretto o a sandwich in base ai requisiti e alla sensibilità del test.
• Poiché l'immunogeno corrisponde a un frammento ricombinante (amminoacidi 101–200), è probabile che l'anticorpo riconosca un epitopo lineare conservato nella regione N-terminale; potrebbe essere adatto per applicazioni che richiedono proteine denaturate, sebbene il riconoscimento della conformazione nativa debba essere verificato empiricamente.

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