Anticorpo policlonale anti-EIF3J per WB, IF/ICC, ELISA - O75822

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di EIF3J

• Identità proteica: EIF3J (Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit J), noto anche come EIF3S1, eIF3-p35, eIF3-alpha, è codificato dal gene EIF3J (ID Gene 8669). È una subunità centrale del complesso eIF3 di circa 800 kDa.
• Funzione principale nell'inizio della traduzione: EIF3J è un componente del complesso eIF-3 essenziale per la sintesi proteica eucariotica. eIF-3 si associa alla subunità ribosomiale 40S e facilita il reclutamento di eIF-1, eIF-1A, eIF-2:GTP:metionil-tRNAi ed eIF-5 per formare il complesso di pre-inizio 43S (43S PIC). Stimola inoltre il reclutamento dell'mRNA al 43S PIC e la scansione per il riconoscimento del codone di inizio AUG. Riferimenti correlati: PMID:25849773, PMID:27462815
• Riciclo dei ribosomi: Il complesso eIF-3 è necessario per lo smontaggio e il riciclo dei complessi ribosomiali post-terminazione, impedendo l'unione prematura delle subunità 40S–60S prima dell'inizio.
• Ruolo regolatorio nella traduzione: Il complesso eIF-3 mira selettivamente e controlla la traduzione di un sottoinsieme di mRNA coinvolti nella proliferazione cellulare, differenziazione e apoptosi, utilizzando diverse modalità di legame stelo-ansa dell'RNA per esercitare attivazione o repressione traduzionale. Riferimenti correlati: PMID:25849773
• Localizzazione subcellulare: Prevalentemente citoplasmatica, coerente con il suo ruolo nell'inizio della traduzione sui ribosomi citoplasmatici.
• Modifiche post-traduzionali: EIF3J può essere acetilato, fosforilato, modificato mediante formazione di legami isopeptidici (simile all'ubiquitina) e ubiquitinato, come evidenziato da studi di proteomica. Queste modifiche possono regolare l'assemblaggio e l'attività del complesso.
• Splicing alternativo: Esistono molteplici varianti di trascritto per EIF3J, che potenzialmente producono isoforme con funzioni o pattern di espressione distinti.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato generato contro una proteina ricombinante che copre gli amminoacidi 1–258 di EIF3J umano. Questa regione N-terminale è probabilmente conservata tra le specie, supportando l'osservata reattività crociata con topo e ratto. Dovrebbe rilevare EIF3J endogeno a lunghezza intera nelle specie rilevanti.
• Western blot (WB): Utilizzare lisati cellulari totali da campioni umani, di topo o di ratto. Il peso molecolare previsto è di circa 29 kDa. Validare la specificità includendo controlli di knockdown o sovraespressione e ottimizzare le quantità di caricamento per evitare la saturazione.
• Immunofluorescenza/ICC: EIF3J si localizza nel citoplasma; permeabilizzare le cellule con un detergente blando (es. 0,1% Triton X-100) e bloccare con siero appropriato per la specie ospite. Testare diluizioni dell'anticorpo a partire da 1:50–1:200.
• ELISA: Confermare il legame utilizzando proteina EIF3J ricombinante o peptide corrispondente alla sequenza dell'immunogeno. Ottimizzare la concentrazione di rivestimento (tipicamente 1–10 µg/mL) e le condizioni di rilevamento.
• Gestione dei campioni: Spedire su borse di ghiaccio; all'arrivo, conservare le aliquote a -20°C o -80°C. Evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.

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