Anticorpo policlonale coniglio Anti-eIF4A per WB, IF/ICC, ELISA - P60842 / Q14240 / P38919

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di eIF4A

• eIF4A-1 (P60842), noto anche come DDX2A, è un'RNA elicasi dipendente da ATP e una subunità core del complesso di iniziazione della traduzione eIF4F.
• Come componente di eIF4F, eIF4A-1 partecipa all'iniziazione della traduzione cap-dipendente svolgendo le strutture secondarie dell'RNA nella 5'-UTR degli mRNA, permettendo al ribosoma di legarsi e scandire alla ricerca del codone di inizio.
  Riferimenti bibliografici: PMID:20156963
• Questa attività di elicasi è essenziale per una sintesi proteica efficiente e contribuisce alla proliferazione e alla crescita cellulare.
• La famiglia eIF4A è composta da tre membri altamente omologhi: eIF4A-1 (P60842), eIF4A-2 (Q14240) e eIF4A-3 (P38919), tutti condividono domini conservati di elicasi a scatola DEAD.
• La localizzazione subcellulare include il citoplasma, la regione perinucleare, la membrana cellulare e i granuli di stress, dove viene reclutato in condizioni di stress cellulare.
• Modifiche post-traduzionali come acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione regolano la sua attività e stabilità.
• eIF4A-1 è anche implicato nelle interazioni ospite-virus, svolgendo un ruolo nella replicazione di alcuni virus.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre la regione N-terminale (aa 1-100) di eIF4A-1 umano. L'anticorpo policlonale ottenuto può riconoscere più membri della famiglia eIF4A a causa dell'elevata conservazione della sequenza; si consiglia di verificare la specificità per l'isoforma bersaglio nel lisato cellulare o tissutale di interesse.
• Per Western blotting, è prevista una banda dominante intorno ai 46 kDa per eIF4A-1, con possibili bande aggiuntive corrispondenti a eIF4A-2 (circa 46 kDa) e eIF4A-3 (circa 48 kDa). Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati.
• Per immunofluorescenza/ICC, si può osservare colorazione nel citoplasma e nel nucleo, con possibile arricchimento nella regione perinucleare o nei granuli di stress in condizioni di stress. Per studi di localizzazione è possibile utilizzare il pretrattamento delle cellule per indurre la formazione di granuli di stress (ad esempio con arsenite).
• Per ELISA, l'anticorpo è adatto come reagente di cattura o rilevamento in formati sandwich; la reattività crociata con altre proteine della famiglia eIF4A deve essere valutata empiricamente.
• Essendo un anticorpo policlonale, è necessario convalidare le prestazioni coerenti tra lotti; per saggi quantitativi si consiglia di utilizzare standard di riferimento interni.

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