Anticorpo policlonale Anti-EP300 per IHC-P, ELISA - Q09472

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone acetiltransferasi p300

• L'istone acetiltransferasi p300 (conosciuto anche come proteina p300 associata a E1A, KAT3B) è un grande coattivatore trascrizionale di ~264 kDa codificato dal gene EP300. Appartiene alla famiglia delle acetiltransferasi p300/CBP che regolano la struttura della cromatina e l'espressione genica.
• p300 funziona come istone acetiltransferasi, acetilando tutti e quattro gli istoni core nei nucleosomi (H2A, H2B, H3, H4). Questa acetilazione degli istoni funge da marcatore epigenetico per l'attivazione trascrizionale e può anche generare doppi marcati acetil-metil (Kacme) sull'istone H3 e H4, associati alla cromatina attiva. Riferimenti correlati: PMID:23415232 PMID:23934153 PMID:8945521 PMID:21131905 PMID:23911289 PMID:37731000
• Oltre agli istoni, p300 acetila numerose proteine non istoniche tra cui fattori di trascrizione (es. p53/TP53, ALX1, FOXO1, STAT3) e altri regolatori (es. HDAC1, SIRT2), modulandone così la stabilità, il legame al DNA o l'attività enzimatica. Partecipa anche alla risposta al danno del DNA acetilando l'istone H1 e PCNA. Riferimenti correlati: PMID:11511361 PMID:15448695 PMID:15653507 PMID:12929931 PMID:18722353
• p300 mostra un'attività aciltransferasi versatile, utilizzando vari substrati di acil-CoA per catalizzare la crotonilazione, butirrilazione, 2-idrossiisobutirrilazione, lattilazione, propionilazione e isonicotinilazione degli istoni, collegando il metabolismo allo stato della cromatina. Riferimenti correlati: PMID:17267393 PMID:25818647 PMID:29775581 PMID:31645732
• La localizzazione subcellulare include nucleo, citoplasma e cromosomi. La p300 nucleare viene reclutata ai promotori da fattori di trascrizione specifici ed è implicata nella regolazione del ritmo circadiano attraverso interazioni con CLOCK/BMAL1. Riferimenti correlati: PMID:14645221
• p300 è un substrato per diverse modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, fosforilazione, metilazione, citrullinazione e ubiquitinazione, che regolano finemente la sua attività e le sue interazioni. Il suo bromodominio riconosce le lisine acetilate e la proteina contiene motivi a dita di zinco.
• Nella patogenesi virale, p300 viene sequestrato dalla proteina Tat dell'HIV-1 per facilitare la trascrizione provirale e interagisce con l'E1A dell'adenovirus, collegandolo alla trasformazione cellulare.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante che copre gli amminoacidi 940-1030, una regione che può coprire parte del dominio catalitico HAT o altre regioni funzionali; questo progetto può essere adatto per rilevare la p300 full-length e possibilmente distinguerla dalla CBP altamente omologa. Verificare la specificità utilizzando modelli di knockout o knockdown.
• Le applicazioni consigliate dal fornitore sono IHC-P e ELISA. Per l'immunoistochimica, considerare le condizioni di recupero dell'antigene e ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo per i pattern di colorazione nucleare e citoplasmatica. Per l'ELISA, convalidare utilizzando la proteina p300 ricombinante come standard.
• Data la sua grande dimensione (264 kDa), utilizzare un'elettroforesi su gel appropriata (es. SDS-PAGE al 6-8%) e tempi di trasferimento prolungati per il western blot, se si tenta di eseguirlo.
• Secondo i dati del fornitore, presenta reazione crociata con la p300 di topo e ratto, consentendone l'utilizzo in modelli di roditori. Tuttavia, confermare la reattività con il tuo tessuto/linea cellulare specifico.

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