Anticorpo policlonale Anti-EPHA4 per WB, IF/ICC, ELISA - P54764

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di EPHA4

• Efrina tipo-A recettore 4 (EPHA4, noto anche come EK8, SEK, HEK8, TYRO1) è un membro della famiglia dei recettori Eph delle tirosin-chinasi recettoriali, codificato dal gene EPHA4.
• EPHA4 lega i ligandi efrina ancorati alla membrana sulle cellule adiacenti, avviando una segnalazione bidirezionale (diretta attraverso il recettore e inversa attraverso il ligando). È particolarmente promiscuo, attivato sia dai ligandi efrina-A legati a GPI (es. EFNA1) sia dai ligandi efrina-B transmembrana (es. EFNB3).
• Nel sistema nervoso in via di sviluppo, EPHA4 svolge un ruolo fondamentale nella guida assonale, inclusa la formazione delle proiezioni corticospinali, e segrega gli assoni motori e sensoriali durante la formazione del circuito neuromuscolare.
• Al di là dello sviluppo, EPHA4 regola la plasticità sinaptica nel cervello adulto e inibisce la rigenerazione assonale dopo una lesione. Contribuisce anche alla formazione vascolare del sistema nervoso centrale.
• Subcellolarmente, EPHA4 si localizza sulla membrana cellulare, sulle proiezioni assonali e dendritiche, sulle membrane della densità postsinaptica, negli endosomi precoci e nelle giunzioni aderenti.
• EPHA4 è espresso ubiquamente in tutti i tessuti e partecipa a diversi eventi di segnalazione cellula-cellula, inclusi lo sviluppo dell'epitelio timico e la separazione delle cellule pilastro cocleari. Può fosforilare CAPRIN1 per promuovere la formazione di compartimenti senza membrana (Per similarità).

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre il dominio extracellulare N-terminale (aa 20–100), pertanto l'anticorpo è previsto che riconosca il recettore a lunghezza intera e possa rilevare frammenti solubili o l'ectodominio clivato.
• In WB in condizioni riducenti, attendersi una banda che migra a ~110 kDa in lisati di tessuti/linee cellulari di uomo, topo o ratto. Eseguire controlli positivi e negativi appropriati per la convalida della specificità.
• Per IF/ICC, EPHA4 mostra tipicamente una colorazione della membrana plasmatica e delle proiezioni neuronali. Utilizzare una fissazione ottimizzata (es. 4% PFA) e permeabilizzazione per preservare l'accessibilità all'epitopo e la morfologia.
• Nelle applicazioni ELISA, il riconoscimento dell'epitopo extracellulare può essere sfruttato per saggi sandwich o studi di competizione per il legame al ligando. Convalidare il saggio con proteina EPHA4 ricombinante, se disponibile.
• Poiché EPHA4 è altamente conservata, non può essere esclusa la reattività incrociata con altri recettori Eph; l'identità delle bande rilevate deve essere confermata tramite knockdown siRNA o modelli KO, quando possibile.

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