Anticorpo policlonale anti-EPS8 per WB, ELISA - Q12929

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di EPS8

• EPS8 (sottoprodotto 8 della chinasi del recettore del fattore di crescita epidermico) è una proteina adattatrice di segnalazione che regola la dinamica del citoscheletro di actina, controllando processi come la migrazione cellulare e la funzione delle cellule dendritiche. È stato inizialmente identificato come un substrato per la chinasi del recettore EGF.
• La proteina funziona come parte di un complesso trimetrico con SOS1 e ABI1 per trasdurre segnali da Ras a Rac attivando l'attività GEF specifica per Rac, collegando la segnalazione dei fattori di crescita al rimodellamento dell'actina.
• EPS8 mostra attività duali di modulazione dell'actina: capping dell'estremità barbed quando legato ad ABI1 (inibendo la motilità) e bundling dell'actina quando associato a BAIAP2 per promuovere estensioni filopodiali e protrusioni della membrana.
• Nei neuroni, EPS8 regola negativamente la formazione di filopodi assonali attraverso il capping dell'actina; tuttavia, la fosforilazione indotta da BDNF inibisce questa attività di capping, consentendo la crescita dei filopodi.
• Alla punta delle stereocilia nelle cellule ciliate, EPS8 forma un complesso con WHRN e MYO15A che è essenziale per l'allungamento del nucleo di actina, e le mutazioni in EPS8 sono associate alla sordità non sindromica (DFNB102).
• A livello subcellulare, si localizza alla corteccia cellulare, ai ruffles, ai coni di crescita, alle stereocilia e ai sinaptosomi, coerente con i suoi ruoli nelle protrusioni della membrana guidate dall'actina dinamica.
• La proteina contiene un dominio SH3 e subisce fosforilazione e ubiquitinazione; la degradazione mediata dall'ubiquitina è richiesta durante la fase G2 per i cambiamenti di forma cellulare associati alla progressione del ciclo cellulare.
• Ampiamente espresso nei tessuti tra cui cervello, cuore, polmone, fegato, rene e pancreas, così come in molte linee cellulari epiteliali e fibroblastiche.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-200) di EPS8 umano, che include parte del dominio SH3 e della regione N-terminale. Questa regione è relativamente conservata tra umano, topo e ratto, spiegando la reattività crociata. Considerare l'allineamento delle sequenze se si lavora con altre specie.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di ~92 kDa (basato su UniProt: 91.9 kDa). Possono essere osservate bande vicino a questa dimensione; tuttavia, la fosforilazione o altre modifiche potrebbero causare lievi spostamenti. Validare con appropriati controlli positivi e negativi.
• Nelle applicazioni ELISA, utilizzare proteina EPS8 ricombinante ben caratterizzata o lisati cellulari da linee con espressione nota. Poiché EPS8 è ampiamente espresso, scegliere un sistema con livelli di espressione da moderati ad alti.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza lotto-per-lotto può variare; considerare di eseguire esperimenti pilota quando si cambiano lotti, in particolare per saggi quantitativi.

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