Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-ERCC8 per WB, ELISA - Q13216

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di ERCC8

• ERCC8 (noto anche come CSA, CKN1, UVSS2) è una proteina di riparazione per escissione del DNA e un componente di riconoscimento del substrato del complesso CSA.
• Il complesso CSA è un complesso ligasi E3 ubiquitina-proteina di tipo DCX (DDB1-CUL4-X-box) che funziona nella riparazione per escissione di nucleotidi accoppiata alla trascrizione (TC-NER), rimuovendo rapidamente le lesioni che bloccano l'RNA polimerasi II dal filamento trascritto di geni attivi. Riferimenti correlati: PMID:12732143 PMID:16751180 PMID:16964240
• Dopo il reclutamento all'RNA polimerasi II bloccata dalla lesione, il complesso CSA media l'ubiquitinazione della subunità POLR2A/RPB1 di Pol II a livello della Lis-1268, un passaggio critico che regola la stabilità dell'RNA Pol II e avvia l'escissione del danno tramite il reclutamento di TFIIH. Riferimenti correlati: PMID:12732143 PMID:16751180 PMID:16964240
• Il complesso CSA promuove anche l'ubiquitinazione e la degradazione proteasomica di ERCC6/CSB in modo UV-dipendente, essenziale per il recupero della sintesi dell'RNA dopo la riparazione. Riferimenti correlati: PMID:16751180
• ERCC8 svolge un ruolo nella riparazione delle rotture del doppio filamento di DNA (DSB) mediante giunzione non omologa delle estremità (NHEJ). Riferimenti correlati: PMID:29545921
• ERCC8 si localizza nel nucleo, in particolare sui cromosomi e sulla matrice nucleare.
• Come proteina con ripetizioni WD, ERCC8 contiene più domini WD40 e le sue mutazioni sono associate alla sindrome di Cockayne, un disturbo caratterizzato da nanismo, sordità e fotosensibilità.
• ERCC8 subisce splicing alternativo ed è una fosfoproteina, soggetta a modificazioni post-traduzionali.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide sintetico corrispondente alla regione C-terminale (aa 300-396) di ERCC8 umano. Questo design può migliorare la specificità per la proteina bersaglio.
• Per il Western blotting (WB), convalidare l'anticorpo utilizzando controlli positivi e negativi appropriati. Rilevare ERCC8 endogeno in lisati di cellule umane e di topo al peso molecolare previsto di 44 kDa.
• Per l'ELISA, ottimizzare l'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo per ottenere una sensibilità adeguata. Abbinare a un sistema di rilevamento compatibile.
• Se si osserva un segnale debole o assente, considerare di testare diversi tamponi di blocco, tempi di incubazione dell'anticorpo o metodi di preparazione del lisato. La recupero dell'epitopo indotto dal calore generalmente non è richiesto per il western blotting.

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