Anticorpo Policlonale coniglio Anti-ERK2 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P28482

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di ERK2

• ERK2 (MAPK1) è una serina/treonina chinasi e una componente essenziale della cascata di segnalazione MAPK/ERK, agendo insieme a ERK1 (MAPK3) per regolare diversi processi cellulari tra cui crescita, adesione, sopravvivenza e differenziazione attraverso la fosforilazione di oltre 160 substrati. Riferimenti correlati: PMID:35831023
• La chinasi fosforila un'ampia gamma di bersagli citoplasmatici, nucleari e organellari, come fattori di trascrizione (ATF2, ELK1, FOS), proteine del citoscheletro (MAP2, CTTN), regolatori dell'apoptosi (BAD, MCL1) e controllori della traduzione (EIF4EBP1), orchestrando così l'espressione genica, le dinamiche del citoscheletro e l'apoptosi.
• In condizioni di ipossia, ERK2 fosforila PGK1 nei mitocondri per sopprimere la formazione di acetil-coenzima A dal piruvato (PubMed:26942675). Riferimenti correlati: PMID:26942675
• ERK2 funziona anche come repressore trascrizionale, legandosi alle sequenze consenso [GC]AAA[GC] per downregolare i geni indotti dall'interferone gamma come CCL5, IRF7 e OAS1 indipendentemente dalla sua attività chinasi.
• La localizzazione subcellulare dipende dal contesto: ERK2 si trova nel citoplasma, associato al citoscheletro e al fuso mitotico, nel nucleo, ai centrosomi, alle caveole della membrana e alle adesioni focali, il che riflette i suoi diversi ruoli di segnalazione.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono la fosforilazione (motivo TEY dell'anello di attivazione), l'acetilazione e l'ubiquitinazione, con implicazioni per la durata del segnale e la localizzazione cellulare. È classificato con le parole chiave: Chinasi, Proteina chinasi serina/treonina, Fosfoproteina, Acetilazione, Coniugazione dell'ubiquitina e altre.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto è di 41 kDa; si consiglia di utilizzare lisati di cellule intere di HeLa, HEK293 o Jurkat come controlli positivi, poiché ERK2 è espresso in modo ubiquitario.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), testare una gamma di metodi di recupero dell'antigene e diluizioni dell'anticorpo, poiché la localizzazione di ERK2 è sia nucleare che citoplasmatica; devono essere validati sezioni di tessuto normale e tumorale adatte.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), condizioni ottimali di fissazione e permeabilizzazione preservano sia il segnale nucleare che quello citoscheletrico di ERK2; si consiglia di effettuare una colorazione simultanea con marcatori specifici di compartimento.
• L'applicazione ELISA può essere adattata per la rilevazione quantitativa; abbinarla a un anticorpo di cattura per ERK2 e validarla in matrici di proteine ricombinanti e campioni nativi.
• L'immunogeno si trova all'interno dei residui 200–300, una regione distinta dal motivo TEY regolatorio; questo anticorpo può riconoscere sia ERK2 fosforilato che non fosforilato: convalidare il comportamento dipendente dalla fosforilazione se necessario.
• Trattandosi di un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti deve essere verificata per ogni applicazione; la validazione KO (se disponibile) supporta la specificità per il bersaglio.

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