Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fibrillarin/U3 RNP per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P22087

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Fibrillarin/U3 RNP

• La fibrillarina, codificata dal gene FBL (conosciuto anche come FIB1, FLRN), è una proteina nucleolare altamente conservata e originariamente identificata come l'antigene sclerodermico nucleolare da 34 kDa.
• Funziona come metiltransferasi dipendente da S-adenosil-L-metionina che catalizza la 2'-O-metilazione sito-specifica delle porzioni ribosio nell'RNA pre-ribosomiale (pre-rRNA), guidata dagli RNA nucleolari piccoli box C/D (snoRNA) (per similarità). Riferimenti correlati: PMID:30540930
• La fibrillarina è un componente centrale del processoma della subunità piccola (SSU), il precursore più antico della subunità ribosomiale piccola, e assiste nel ripiegamento, nelle modificazioni e nella scissione del pre-rRNA. Riferimenti correlati: PMID:34516797
• Oltre alla metilazione dell'RNA, la fibrillarina agisce come proteina metiltransferasi, mediando la metilazione dell'istone H2A sulla glutammina 105 (H2AQ104me), che riduce l' binding del complesso FACT nel locus del DNA ribosomiale. Riferimenti correlati: PMID:24352239, PMID:30540930
• Catalizza inoltre la 2'-O-metilazione dell'RNA nucleare piccolo U6 (snRNA) all'interno dei complessi box C/D RNP, una modificazione fondamentale per la fedeltà dello splicing del pre-mRNA. Riferimenti correlati: PMID:32017898
• Subcellularmente, la fibrillarina risiede prevalentemente nel nucleolo, con un'ulteriore presenza nel nucleoplasma, in linea con i suoi ruoli nel processamento dell'RNA ribosomiale e nello splicing.
• Le modificazioni post-traduzionali della fibrillarina comprendono acetilazione, fosforilazione e metilazione, oltre alla formazione di legami isopeptidici e la coniugazione ubiquitino-simile, che possono regolarne l'attività e la localizzazione.
• La proteina ha un peso molecolare di 33784 Da ed è ampiamente studiata come marcatore della struttura e della funzione nucleolare.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 100-321) copre una regione centrale della fibrillarina, altamente conservata tra le specie; è quindi prevista la reattività crociata con topo, ratto e scimmia.
• Nel Western blot si osserverà una banda principale a circa 34 kDa, corrispondente alla proteina full-length; possono comparire bande aggiuntive dovute a modificazioni post-traduzionali o isoforme.
• Per l'immunofluorescenza, la fibrillarina localizza nel nucleolo e nel nucleoplasma; la co-colorazione con marcatori nucleolari come la nucleolina può confermare la specificità.
• Per l'immunoprecipitazione, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo e le condizioni di incubazione; si consiglia di utilizzare estratti nucleari per arricchire la proteina bersaglio.
• Eseguire controlli appropriati (ad esempio peptide di blocco, lisati di knockout) per confermare la specificità dell'anticorpo nel proprio sistema sperimentale.

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