Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-FTO per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - Q9C0B1

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di FTO

• FTO (proteina associata a massa grassa e obesità) è una diossigenasi dipendente da alfa-chetoglutarato che funziona come RNA demetilasi. Conosciuta anche come ALKBH9, appartiene alla famiglia di diossigenasi AlkB.
• Media la demetilazione ossidativa della N6-metiladenosina (m6A) nell'mRNA, la modifica interna più prevalente negli eucarioti superiori, regolando così l'espressione e la stabilità dell'mRNA. Riferimenti correlati: PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295
• FTO demetila anche la N6,2'-O-dimetiladenosina (m6Am) nei cappucci dell'mRNA, influenzando la stabilità dell'mRNA promuovendo la decappatura, e agisce sull'm6A dello snRNA U6. Riferimenti correlati: PMID:28002401, PMID:30197295
• Funziona come tRNA demetilasi rimuovendo la N1-metiladenina e ha una bassa attività verso la riparazione del DNA/RNA alchilato, sebbene il suo ruolo in vivo nella riparazione del DNA sia incerto. Riferimenti correlati: PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• La localizzazione subcellulare è principalmente nucleare, con presenza in speckles nucleari e citoplasma.
• FTO è espressa in modo ubiquitario, con alta espressione nelle ghiandole surrenali, nel cervello (ipotalamo e ipofisi), ed è sovraespressa in alcune leucemie mieloidi acute con alterazioni genetiche specifiche. Riferimenti correlati: PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione e coniugazione simil-ubiquitina, che possono regolarne l'attività e la stabilità.
• Svolge un ruolo cruciale nella regolazione della massa grassa, dell'adipogenesi, del peso corporeo e dell'omeostasi energetica, ed è coinvolta nella termogenesi e nella differenziazione degli adipociti. Riferimenti correlati: PMID:18775698, PMID:20376003, PMID:26287746
• Ruolo oncogenico nella leucemia mieloide acuta demetilando m6A su trascritti di oncogeni come MYC, CEBPA, ASB2 e RARA, promuovendone l'espressione. Riferimenti correlati: PMID:28017614, PMID:29249359

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide della regione N-terminale (aa 1-100), che può rilevare FTO a lunghezza intera e possibilmente alcuni isoforme. Includere controlli positivi e negativi (es. lisati sovraesprimenti FTO o campioni trattati con siRNA) per confermare la specificità.
• Per il Western blot (WB), eseguire campioni proteici ridotti e denaturati; la dimensione attesa della banda è ~58 kDa. Utilizzare appropriati controlli di caricamento e condizioni di blocco.
• In IHC-P e IF/ICC, testare diversi metodi di fissazione e recupero dell'antigene. Le sezioni incluse in paraffina possono richiedere il recupero dell'epitopo indotto dal calore. Validare la colorazione utilizzando tessuti noti positivi (cervello, surrenali) e includere controlli isotipo.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può essere adatto per catturare complessi FTO nativi. Ottimizzare le condizioni del tampone di lisi e la quantità di anticorpo per una data proteina totale.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato sia in formati diretti che sandwich; ottimizzare le condizioni di rivestimento e rilevamento in base alle specifiche esigenze del saggio.

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