Anticorpo policlonale di coniglio anti-FTO per WB, IP, ELISA - Q9C0B1

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della FTO

• La FTO (proteina associata alla massa grassa e all'obesità) è una diossigenasi dipendente dall'alfa-chetoglutarato che agisce come demetilasi dell'RNA, catalizzando la demetilazione ossidativa della N6-metiladenosina (m6A) nell'mRNA, nello snRNA U6 e nella modifica m6A(m) del cappuccio 5'. Riferimenti correlati: PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295, PMID:28002401
• Demetila inoltre la N1-metiladenina nei tRNA e può riparare il DNA/RNA alchilato in vitro, sebbene la rilevanza in vivo non sia certa. Riferimenti correlati: PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• Modulando i livelli di m6A, la FTO regola la stabilità, lo splicing e la traduzione dell'mRNA, influenzando così l'adipogenesi, il peso corporeo e l'omeostasi energetica. Riferimenti correlati: PMID:18775698, PMID:26287746
• La FTO è espressa ubiquitariamente, con i livelli più elevati nelle ghiandole surrenali e nel cervello (in particolare nell'ipotalamo e nell'ipofisi), ed è sovraespressa in alcune leucemie mieloidi acute (AML) con specifici riarrangiamenti genetici. Riferimenti correlati: PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• La localizzazione subcellulare comprende il nucleo (con arricchimento negli speckle nucleari) e il citoplasma, riflettendo i suoi ruoli nell'elaborazione e nella traduzione dell'RNA.
• La FTO appartiene alla famiglia di diossigenasi ALKBH e contiene un dominio di legame del ferro e del 2-ossoglutarato essenziale per la sua attività catalitica.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione e coniugazione simile all'ubiquitina, che possono regolarne la stabilità e l'attività.
• La FTO agisce come oncogene nell'AML demetilando e stabilizzando gli mRNA di fattori leucemogenici quali MYC e CEBPA. Riferimenti correlati: PMID:28017614, PMID:29249359

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 327–504 (regione C-terminale) della FTO umana. Si prevede che questo anticorpo policlonale riconosca molteplici epitopi, garantendo una rilevazione robusta in condizioni denaturanti e native.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto è di circa 58 kDa; validare l'espressione in lisati di controllo positivi (ad esempio cervello, linee cellulari AML) e considerare l'uso di inibitori delle fosfatasi per preservare gli stati di fosforilazione.
• Nell'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può catturare complessi FTO–RNA; effettuare il crosslinking o utilizzare condizioni prive di RNasi se si desidera preservare le interazioni RNA–proteina.
• Per l'ELISA, confermare la specificità mediante il rivestimento con FTO ricombinante e saggi di inibizione competitiva; la reattività crociata indicata con topo e ratto consente la progettazione di studi su più specie.
• Quando si confronta l'espressione tra tessuti o trattamenti, confermare il caricamento uniforme e tenere conto della regolazione dinamica della FTO da parte delle vie metaboliche e dello stress.

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