Anticorpo policlonale coniglio Anti-GCN2 per WB, IF/ICC, ELISA - Q9P2K8

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di GCN2

• GCN2, codificato da EIF2AK4, è una serina/treonina protein chinasi sensibile allo stress metabolico che fosforila eIF-2-alfa in risposta a una bassa disponibilità di amminoacidi, attivando la risposta integrata allo stress (ISR). Riferimenti correlati: PMID:25329545 PMID:32610081
• La fosforilazione di eIF-2-alfa lo converte in un inibitore della traduzione globale, attenuando la sintesi proteica dipendente dalla capside consentendo al contempo la traduzione selettiva di mRNA specifici per l'ISR come ATF4, riprogrammando così l'espressione genica biosintetica degli amminoacidi. Riferimenti correlati: PMID:32610081
• La proteina è coinvolta nella regolazione del ciclo cellulare promuovendo la repressione della traduzione dell'mRNA della ciclina D1 dopo l'attivazione dell'UPR o l'attivazione della traduzione di CDKN1A/p21 in condizioni di deprivazione amminoacidica. Riferimenti correlati: PMID:26102367
• GCN2 contiene un dominio di legame per l'ATP, un dominio chinasi e un dominio di legame per l'RNA di trasferimento, che gli permette di percepire direttamente gli tRNA non caricati e collegare lo stato nutrizionale al controllo della traduzione.
• Si localizza principalmente nel citoplasma ed è ampiamente espresso, con una presenza notevole nel polmone, nelle cellule muscolari lisce e nei macrofagi.
• La chinasi svolge un ruolo pro-sopravvivenza e pro-apoptotico a seconda del contesto di stress, ed è anche coinvolta nella difesa antivirale, promuovendo l'autofagia e la presentazione antigenica durante l'infezione da virus della febbre gialla. Riferimenti correlati: PMID:24310610
• Lo splicing alternativo genera più isoforme e la proteina è soggetta a modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione e fosforilazione, che regolano la sua attività.
• Oltre alla percezione dei nutrienti, GCN2 contribuisce alla plasticità sinaptica, all'apprendimento, alla formazione della memoria a lungo termine e all'inibizione della crescita dei neuriti nel contesto neuronale.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per la WB, si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6–8%) per risolvere la proteina GCN2 ad alto peso molecolare (~187 kDa) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine di grandi dimensioni.
• Nell'IF/ICC, è prevista una colorazione prevalentemente citoplasmatica; convalidare la localizzazione subcellulare con marcatori di organelli nel sistema cellulare di interesse.
• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1–300); verificare la specificità nelle specie pertinenti (uomo, topo, ratto) utilizzando controlli positivi e negativi.
• Accoppiare con controlli di caricamento appropriati e considerare l'uso di inibitori di proteasi/fosfatasi durante la lisi a causa di potenziali modifiche post-traduzionali che influenzano la migrazione proteica.

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