Anticorpo policlonale anti-GNRH1 per WB, IF/ICC, ELISA - P01148

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del GNRH1

• La progonadoliberina-1 (GNRH1) è una proteina precursore che viene elaborata per produrre l'ormone di rilascio delle gonadotropine 1 (GnRH), un regolatore chiave dell'asse riproduttivo.
• Il GnRH stimola l'ipofisi anteriore a secernere l'ormone luteinizzante (LH) e l'ormone follicolo-stimolante (FSH), essenziali per la funzione gonadica.
• La proteina è codificata dal gene GNRH1, noto anche come GNRH, GRH e LHRH, situato sul cromosoma 8.
• Viene sintetizzata come preproproteina con un peptide segnale (aa 1-23) e il decapeptide maturo (aa 24-33) viene rilasciato dopo il clivaggio proteolitico.
• A livello subcellulare, il GNRH1 è indirizzato verso la via secretoria e viene secreto dai neuroni ipotalamici.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'amidazione del C-terminale, la formazione di acido piroglutammico all'N-terminale e il clivaggio a residui basici accoppiati.
• Il peso molecolare del precursore non elaborato è di circa 10,38 kDa, ma l'elaborazione produce peptidi attivi più piccoli.
• Le mutazioni nel GNRH1 sono associate all'ipogonadismo ipogonadotropo e alla sindrome di Kallmann, evidenziandone la rilevanza clinica.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato corrisponde agli amminoacidi 24-92, che include il decapeptide maturo di GnRH e le sequenze fluttuanti; pertanto, l'anticorpo può riconoscere sia la forma precursore che quella elaborata.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto del precursore a lunghezza intera è di circa 10 kDa; utilizzare un gel ad alta percentuale (es. 15%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per trattenere i piccoli peptidi.
• Il rilevamento del peptide maturo secreto nel WB potrebbe richiedere la concentrazione del sopranatante di coltura o protocolli di estrazione dei peptidi.
• Nell'IF/ICC, il GNRH1 è secreto; considerare l'uso di inibitori dell'apparato di Golgi (es. brefeldina A) per visualizzare l'accumulo intracellulare nelle cellule neuroendocrine.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento; convalidare le prestazioni con standard di GnRH ricombinante.
• La reattività crociata con topo e ratto suggerisce epitopi conservati; tuttavia, verificare sempre la specificità nella specie e nel tipo di tessuto rilevanti.

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