Anticorpo policlonale anti-GRID2 per WB, IF/ICC, ELISA - O43424

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di GRID2

• GRID2 codifica il recettore ionotropico del glutammato delta-2 (GluD2), un membro della famiglia dei recettori ionotropici del glutammato strutturalmente simile ad altre subunità iGluR, ma atipico per quanto riguarda il legame al ligando.
• Sebbene condivida la topologia classica degli iGluR, GluD2 non lega il glutammato come ligando primario (PubMed:34936451). Invece, partecipa a complessi di segnalazione non canonici. Riferimenti correlati: PMID:34936451
• Funzione principale: promuove la sinaptogenesi e media la depressione a lungo termine (LTD) dipendente dalla D-serina e l'endocitosi dei recettori AMPA nelle sinapsi tra fibre parallele e cellule di Purkinje del cervelletto attraverso il complesso eterotrimerico NRX1B–CBLN1–GRID2 (PubMed:27418511). Riferimenti correlati: PMID:27418511
• In presenza di neurexine e cerebelline, GluD2 forma canali ionici selettivi per i cationi, regolati dalla glicina e dalla D-serina (PubMed:34936451). Riferimenti correlati: PMID:34936451
• L'attività del canale ionico può essere attivata dal recettore metabotropico del glutammato 1 (GRM1) nelle cellule di Purkinje (PubMed:24357660, PubMed:27276689). Riferimenti correlati: PMID:24357660 PMID:27276689
• Localizzazione subcellulare: principalmente sulle membrane cellulari postsinaptiche delle sinapsi eccitatorie, con particolare abbondanza nel cervelletto.
• Presenta molteplici modificazioni post-traduzionali e motivi strutturali, tra cui ponti disolfuro, glicosilazione, fosforilazione e siti di legame per i metalli, come indicato dalle parole chiave di Swiss-Prot (splicing alternativo, calcio, membrana cellulare, canale ionico, canale ionico regolato da ligando, neurodegenerazione, membrana cellulare postsinaptica, sinapsi, transmembrana).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: il peptide sintetico comprende gli amminoacidi 900–1007 nella regione intracellulare C-terminale; l'anticorpo può riconoscere la proteina a lunghezza intera e potenziali frammenti C-terminali.
• Western blotting: è attesa una banda intorno a 113 kDa; utilizzare lisati di cervelletto o cervello come controlli positivi. Se possibile, validare con campioni sottoposti a knockdown mediante siRNA o knockout mediante CRISPR.
• IF/ICC: si raccomanda la permeabilizzazione per consentire l'accesso all'epitopo citoplasmatico. Nelle colture neuronali, la colorazione dovrebbe localizzarsi nei puncta sinaptici.
• ELISA: adatto per la rilevazione quantitativa; considerare la pre-incubazione con il peptide immunizzante per verificare la specificità del segnale.
• Reattività crociata: si prevede una reattività con campioni umani, di topo e di ratto sulla base dell'omologia di sequenza; eseguire una verifica propria nel sistema sperimentale.

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