Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-GSDMD (Lunghezza intera + terminale C) per WB, ELISA - P57764

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della GSDMD

• La Gasdermina-D (GSDMD) è un membro della famiglia delle gasdermine e funge da precursore di una proteina porogena fondamentale per la piroptosi e la difesa dell'ospite. Riferimenti correlati: PMID:26375003, PMID:26375259, PMID:27281216
• Dopo la scissione da parte delle caspasi infiammatorie (CASP1/4/5), il frammento N-terminale si trasloca sulla membrana plasmatica, si lega a lipidi del foglio interno come i fosfati di fosfatidilinositolo e oligomerizza formando pori di 10-15 nm, rilasciando IL-1β e IL-18 e innescando la piroptosi. Riferimenti correlati: PMID:27281216, PMID:27418190, PMID:29898893
• I pori di GSDMD mediano anche la permeabilizzazione della membrana mitocondriale, portando al rilascio di mtDNA, e il frammento N-terminale mostra attività battericida diretta sia contro i batteri Gram-negativi che Gram-positivi. Riferimenti correlati: PMID:27281216
• Nel piccolo intestino, un frammento scisso da CASP3/7 agisce come coattivatore trascrizionale per STAT1, promuovendo l'espressione di CIITA e MHC di classe II per mantenere la tolleranza alimentare.
• La GSDMD è espressa nelle cellule in differenziazione di esofago e stomaco, e la sua attivazione nelle cellule endoteliali cerebrali può causare la rottura della barriera ematoencefalica durante una piroptosi eccessiva.
• Le modifiche post-traduzionali includono palmitoilazione, fosforilazione e ubiquitinazione; la proteina appartiene alla famiglia delle gasdermine, caratterizzate da un dominio N-terminale porogeno conservato.
• La scissione da parte dell'allergene della papaina genera un frammento porogeno che rilascia specificamente IL-33, innescando l'infiammazione di tipo 2. Riferimenti correlati: PMID:35794369

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (aa 346-484) corrisponde alla porzione C-terminale; pertanto, questo anticorpo può riconoscere sia la GSDMD a lunghezza intera che il frammento C-terminale scisso. Per Western blot, si consiglia di convalidare la rilevazione della proteina endogena in condizioni di attivazione dell'infiammasoma per distinguere le specie scisse.
• Una banda di circa 53 kDa corrisponde alla GSDMD a lunghezza intera; la scissione rilascia il dominio porogeno N-terminale (~31 kDa) e il frammento C-terminale (~22 kDa). Utilizzare controlli appropriati (ad esempio, macrofagi trattati con LPS+ATP) per confermare la specificità.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere adatto come reagente di cattura o di rilevazione. Si consiglia di associarlo a un anticorpo specifico per il dominio N-terminale per quantificare differenzialmente la GSDMD a lunghezza intera rispetto a quella scissa. Ottimizzare empiricamente le condizioni di rivestimento e blocco.
• Poiché la GSDMD forma pori oligomerici, la solubilità e la conformazione possono variare tra i diversi tipi di campione; includere detergenti delicati e sonicazione nei buffer di lisì per un'estrazione efficiente.

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