Anticorpo policlonale di coniglio anti-GSDMD (lunghezza completa+terminale N) per WB, IF/ICC, ELISA - P57764

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della Gasdermina-D

• La Gasdermina-D (GSDMD) è un membro della famiglia delle gasdermine, denominata anche proteina 1 contenente il dominio della gasdermina, codificata dal gene GSDMD (noto anche come DFNA5L, GSDMDC1, FKSG10). Funziona principalmente come precursore di una proteina che forma pori, essenziale per la piroptosi e la difesa dell'ospite contro i patogeni.
• In seguito all'attivazione dell'inflammasoma canonico o non canonico, le caspasi infiammatorie (CASP1, CASP4, CASP5) scindono la GSDMD, liberando il frammento N-terminale che forma pori dall'autoinibizione.
  Riferimenti correlati: PMID:26375003 PMID:26375259 PMID:27418190
• Il frammento N-terminale rilasciato trasloca alla membrana plasmatica, legandosi fortemente ai fosfoinositidi (ad es. PI4P, PI(4,5)P2), all'acido fosfatidico e alla fosfatidilserina, ma non ai fosfolipidi privi di carica, dove oligomerizza formando pori di 10–15 nm.
  Riferimenti correlati: PMID:27281216 PMID:29898893 PMID:36227980
• Questi pori mediano il rilascio di IL-1β e IL-18 mature, citochine fondamentali per la risposta infiammatoria, e possono inoltre rilasciare la caspasi-7 matura e il DNA mitocondriale (mtDNA).
  Riferimenti correlati: PMID:27281216 PMID:27418190 PMID:29898893
• In alcuni tipi cellulari, la morte cellulare piroptotica si verifica in seguito all'attivazione a valle della ninjurina-1 (NINJ1), portando alla rottura della membrana plasmatica.
  Riferimenti correlati: PMID:33472215 PMID:37198476
• Oltre al suo ruolo litico, i frammenti N-terminali della GSDMD possono uccidere direttamente i batteri Gram-negativi e Gram-positivi extracellulari e, in condizioni di coltura cellulare, limitare patogeni intracellulari come Listeria monocytogenes.
  Riferimenti correlati: PMID:27281216
• Nell'intestino tenue, la scissione da parte di CASP3 o CASP7 produce un coattivatore trascrizionale che trasloca nel nucleo, interagisce con STAT1 per indurre l'espressione di CIITA e dell'MHC di classe II, mantenendo così la tolleranza alimentare. (Per similitudine)
• La scissione da parte dell'allergene papaina genera anch'essa il frammento N-terminale che forma pori, il quale rilascia specificamente IL-33 matura, promuovendo l'immunità di tipo 2.
  Riferimenti correlati: PMID:35794369
• La GSDMD è ampiamente espressa, con una presenza significativa nelle cellule sop

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blot, l'anticorpo riconosce un epitopo compreso tra gli amminoacidi 154–252 del dominio N-terminale; pertanto, possono essere rilevati sia la GSDMD a lunghezza completa (predetta a ~53 kDa) sia il frammento N-terminale scisso (~31–34 kDa). Validare nel sistema di campioni pertinente e considerare l'uso di lisati cellulari attivati dall'inflammasoma per osservare i prodotti di scissione.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, la GSDMD può localizzarsi nel citoplasma, nella membrana plasmatica e nel nucleo a seconda dello stato di attivazione. Si raccomanda di ottimizzare le condizioni di permeabilizzazione e fissazione. Includere controlli appropriati per confermare la specificità.
• Per l'ELISA, la natura policlonale consente un possibile utilizzo sia come anticorpo di cattura sia come anticorpo di rilevazione nei formati ELISA a sandwich. L'abbinamento con un anticorpo monoclonale specifico per un epitopo distinto può migliorare la sensibilità. Si consiglia di utilizzare una curva standard con proteina ricombinante.

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