Anticorpo policlonale anti-GUCY2D per WB e ELISA - Q02846

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della GUCY2D

• GUCY2D, nota anche come guanilil ciclasi retinica 1 (ROS-GC, GC-E), è un enzima legato alla membrana codificato dal gene GUCY2D nell'uomo. I suoi molteplici alias associati a malattie includono LCA1, CORD6 e CSNB1I.
• GUCY2D catalizza la conversione di GTP in cGMP, un secondo messaggero chiave nelle cellule fotorecettrici, reintegrando i livelli di cGMP che si esauriscono durante la fototrasduzione nei bastoncelli e nei coni. Questa attività è critica per la trasduzione del segnale visivo (PubMed:15123990, PubMed:21928830, PubMed:26100624). Riferimenti correlati: PMID:15123990 PMID:21928830 PMID:26100624
• Le evidenze suggeriscono che GUCY2D potrebbe essere coinvolta anche nel traffico delle proteine associate alla membrana verso la membrana del segmento esterno dei fotorecettori (Per analogia).
• La proteina si localizza principalmente alla membrana del segmento esterno dei fotorecettori e alla membrana del reticolo endoplasmatico, coerente con il suo ruolo nella trasduzione sensoriale e nel processamento proteico.
• GUCY2D è una glicoproteina che contiene multiple eliche transmembrana, un legame disolfuro e un peptide segnale, caratteristica del suo integrazione membranare e del processamento della via secretoria.
• Le mutazioni in GUCY2D sono associate a diverse distrofie retiniche ereditarie, tra cui l'amaurosi congenita di Leber (LCA1), la distrofia cono-bastoncellare (CORD6) e la cecità notturna stazionaria congenita, sottolineando il suo ruolo essenziale nella visione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Design dell'immunogeno: L'immunogeno proteico di fusione ricombinante corrisponde alla regione N-terminale (aa 52-350) della GUCY2D umana, che potrebbe mirare al dominio extracellulare/luminale. Questo design razionale garantisce la specificità dell'anticorpo evitando le regioni transmembrana altamente idrofobe.
• Western blot (WB): Si prevede una banda intorno a 120 kDa in base al peso molecolare calcolato di circa 120 kDa. A causa della glicosilazione e altre modifiche, la migrazione effettiva può variare. Utilizzare controlli appropriati e convalidare in campioni retinici o derivati da fotorecettori.
• ELISA: L'anticorpo è adatto per ELISA. Considerare il formato ELISA indiretto e convalidare utilizzando la proteina ricombinante o lisati cellulari che esprimono GUCY2D. La reattività crociata con gli ortologhi di topo e ratto può essere vantaggiosa per studi traslazionali.
• Preparazione del campione: Per le proteine di membrana come GUCY2D, assicurarsi di un'adeguata solubilizzazione con detergenti appropriati ed evitare di bollire i campioni per prevenire l'aggregazione. Ottimizzare le condizioni di denaturazione per la propria configurazione sperimentale specifica.

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