Anticorpo policlonale coniglio anti-HDAC3 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O15379

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'HDAC3

• HDAC3 è un'istone deacetilasi di classe I che catalizza la deacetilazione dei residui di lisina sulle code N-terminali degli istoni core (H2A, H2B, H3, H4), portando a una struttura della cromatina condensata e alla repressione trascrizionale epigenetica.
  Riferimenti correlati: PMID:21030595, PMID:23911289
• Funziona come parte di complessi repressori multiproteici come N-Cor ed è reclutato da fattori di trascrizione come BCL6 per deacetilare H3K27 agli elementi enhancer, antagonizzando l'attività di EP300.
  Riferimenti correlati: PMID:23911289, PMID:22230954
• Oltre agli istoni, HDAC3 deacetila una gamma di substrati non istonici tra cui RARA, STAT3, MAPK14 e MEF2D, influenzando vie dall'infiammazione alla sopravvivenza cellulare.
  Riferimenti correlati: PMID:15653507, PMID:21030595, PMID:21444723, PMID:28167758
• HDAC3 agisce anche come deacilasi proteica-lisina, rimuovendo modifiche acil non acetiliche come crotonile (decrotonilazione), lattile (delattilazione) e gruppi 2-idrossisobutirril, con substrati come MAPRE1/EB1 e NBN/NBS1.
  Riferimenti correlati: PMID:28497810, PMID:29192674, PMID:34608293, PMID:38961290
• Nell'orologio circadiano, HDAC3 ha ruoti indipendenti dalla deacetilasi: promuove l'ubiquitinazione di BMAL1 e stabilizza le proteine CRY, regolando così l'espressione genica circadiana e il metabolismo lipidico epatico.
• A livello subcellulare, HDAC3 è prevalentemente nucleare e associato ai cromosomi, ma viene rilevato anche nel citoplasma, coerente con i suoi ruoli di shuttling.
• Ampiamente espresso nei tessuti, HDAC3 è una fosfoproteina con splicing alternativo e molteplici partner di interazione, alla base del suo coinvolgimento in diversi processi biologici.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (aa 299–428) targeting la regione C-terminale dell'HDAC3 umano, conservata nel topo e nel ratto (come indicato dai dati di cross-reattività); verificare la cross-reattività nel sistema modello specifico.
• In Western blot, HDAC3 ha un peso molecolare previsto di ~49 kDa; utilizzare standard proteici appropriati e confermare la specificità della banda con knockdown siRNA o lisati di cellule KO se disponibili.
• Per IHC-P, potrebbero essere richiesti metodi di recupero dell'antigene (es. tampone citrato pH 6.0, indotto dal calore); testare una gamma di diluizioni dell'anticorpo (es. 1:50–1:200) su tessuti di controllo.
• Per IF/ICC, fissare le cellule con PFA al 4% e permeabilizzare con Triton X-100 allo 0,1%; dovrebbe essere osservata la localizzazione nucleare; includere controlli con solo anticorpo secondario.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato in formati diretti o indiretti; titolare contro la proteina HDAC3 ricombinante per determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento e rilevamento.
• Conservare l'anticorpo a -20°C in aliquote; evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per mantenere le prestazioni.

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