Anticorpo policlonale anti-HGFAC per WB ed ELISA - Q04756

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di HGFAC

• HGFAC, noto anche come proteasi serinica attivatrice del fattore di crescita degli epatociti, è un enzima secreto che converte il pro-HGF inattivo (HGF a catena singola) in HGF attivo (eterodimero legato da ponti disolfuro) mediante scissione proteolitica, essenziale per l'avvio della segnalazione del recettore HGF/MET.
• Questa attivazione innesca cascate a valle coinvolte nella proliferazione cellulare, nella motilità, nella morfogenesi e nell'angiogenesi, svolgendo un ruolo cruciale nello sviluppo, nella rigenerazione tissutale e nella progressione tumorale.
• HGFAC viene sintetizzato come zimogeno e contiene diversi domini conservati: un peptide segnale N-terminale, un dominio simile all'EGF, un dominio kringle e un dominio C-terminale di proteasi serinica, caratteristici della famiglia dei fattori di crescita correlati al plasminogeno.
• La proteina è espressa prevalentemente nel fegato, in accordo con la sua funzione critica nella rigenerazione epatica e nell'omeostasi.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione legata all'N e la formazione di ponti disolfuro, fondamentali per il corretto ripiegamento, la stabilità e l'attività enzimatica.
• A livello subcellulare, dopo la secrezione HGFAC è localizzato nello spazio extracellulare, dove svolge la sua funzione di attivatore.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende la regione C-terminale (aa 408-655), che include una porzione del dominio di proteasi serinica; considerare la posizione di questo epitopo nella progettazione di saggi che richiedono il rilevamento delle forme processate o non processate.
• Per il Western blot è prevista una banda intorno a 71 kDa (corrispondente allo zimogeno a lunghezza completa o alla catena pesante processata); convalidare la specificità della banda utilizzando lisati di tessuto epatico o la proteina HGFAC ricombinante come controlli positivi.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere adatto per la cattura o il rilevamento di HGFAC in fluidi biologici come siero o terreno condizionato; la reattività crociata con gli ortologhi di topo e ratto deve essere confermata indipendentemente nella matrice del campione pertinente.
• Poiché HGFAC è una proteasi secreta, raccogliere e manipolare i campioni in condizioni che preservino la stabilità proteica ed evitino la degradazione; considerare l'uso di cocktail di inibitori delle proteasi e mantenere i campioni sul ghiaccio.
• L'attivazione della segnalazione di HGF richiede spesso sia HGFAC sia il suo substrato pro-HGF; gli studi funzionali possono trarre beneficio dalla co-espressione o dall'integrazione di pro-HGF ricombinante.

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