Anticorpo Monoclonale Anti-HIBADH per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P31937

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di HIBADH

• HIBADH (3-idrossiisobutirrato deidrogenasi) è un enzima mitocondriale appartenente alla famiglia delle ossidoreduttasi, che utilizza NAD come cofattore.
• Gioca un ruolo chiave nel catabolismo degli aminoacidi a catena ramificata (valina, leucina, isoleucina), specificamente nella conversione del 3-idrossiisobutirrato in semialdeide metilmalonica.
• La proteina è localizzata nel mitocondrio, come indicato dal suo peptide di transito mitocondriale, che viene clivato per produrre l'enzima maturo.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'acetilazione, che può regolare la sua attività enzimatica o stabilità.
• L'espressione di HIBADH è stata rilevata nei fibroblasti della pelle; la sua espressione in altri tessuti può essere dedotta dal suo ruolo metabolico.
• Studi strutturali hanno fornito una struttura 3D per HIBADH, aiutando a comprendere il suo meccanismo catalitico e il riconoscimento del substrato.
• La proteina è stata identificata attraverso il sequenziamento proteico diretto e approcci di proteomica, confermando la sua presenza nei mitocondri umani.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 37-336 di HIBADH umana (NP_689953.1), che esclude il peptide di transito mitocondriale previsto (approssimativamente i primi 36 amminoacidi); l'anticorpo è quindi probabile che riconosca la forma mitocondriale matura.
• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una banda a circa 35 kDa (coerente con il peso molecolare UniProt di 35,3 kDa). Confermare la specificità utilizzando controlli positivi e negativi appropriati (es. cellule con sovraespressione di HIBADH o tessuti con espressione nota).
• Nell'immunoistochimica (IHC-P) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), dovrebbero essere osservati pattern di colorazione mitocondriale. La co-localizzazione con marcatori mitocondriali può aiutare a validare la specificità.
• L'anticorpo cross-reagisce con HIBADH umana, murina e di ratto; quando si utilizzano campioni di roditori, verificare l'omologia di sequenza nella regione dell'immunogeno per garantire una reattività comparabile.
• Per le applicazioni ELISA, considerare l'utilizzo dell'immunogeno ricombinante come controllo positivo e titolare la concentrazione dell'anticorpo per un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Per minimizzare il legame non specifico, si raccomandano tamponi di bloccaggio adatti (es. latte magro al 5% o BSA) e l'ottimizzazione della diluizione appropriata.

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