Anticorpo policlonale coniglio anti-HIF1AN/FIH1 per WB e ELISA - Q9NWT6

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di HIF1AN/FIH1

• HIF1AN (inibitore del fattore inducibile dall'ipossia 1-alfa), chiamato anche fattore inibente HIF-1 (FIH-1), è un'asparagina idrossilasi che regola la risposta all'ipossia.
• In normossia, idrossila HIF-1α ad Asn-803 nel dominio di transattivazione C-terminale, bloccando il reclutamento dei coattivatori p300/CBP e quindi reprimendo la trascrizione dei geni inducibili dall'ipossia.
• Agisce come sensore diretto dell'ossigeno; la sua attività idrossilasica richiede ossigeno molecolare, ferro e 2-ossoglutarato, collegando la tensione di ossigeno cellulare alla stabilità e all'attività di HIF-1α.
• Oltre a HIF-1α, HIF1AN idrossila residui di asparagina, aspartato e istidina nei domini di ripetizione ankirina (ARD) di diverse proteine, inclusi NFKB1, NOTCH1, ASB4 e TNKS2, modulando vie di segnalazione oltre l'ipossia.
• Regola negativamente la segnalazione Notch idrossilando NOTCH1, il che accelera la differenziazione miogenica; al contrario, l'idrossilazione di ASB4 promuove positivamente la differenziazione vascolare.
• La distribuzione subcellulare include sia il nucleo che il citoplasma, con accumulo perinucleare, riflettendo i suoi ruoli nella regolazione trascrizionale e nelle interazioni proteiche citoplasmatiche.
• Classificato come diossigenasi e ossidoreduttasi dipendente dal ferro; il suo sito attivo contiene un centro di ferro mononucleare essenziale per la catalisi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre virtualmente l'intera proteina HIF1AN (residui 1–349), che comprende il dominio catalitico JmjC; questo design è previsto per generare anticorpi che riconoscono più epitopi, aiutando il rilevamento in saggi denaturanti e nativi.
• Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 40–41 kDa; l'inclusione di un lisato cellulare normossico (es. HeLa, HEK293) come controllo positivo e di un campione trattato con ipossia per valutare glietti dipendenti dall'idrossilazione di HIF-1α potrebbe essere informativa.
• Quando si esegue un ELISA, considerare il rivestimento con HIF1AN ricombinante o un peptide HIF-1α; un ELISA a sandwich accoppiato con un anticorpo di cattura specifico per un epitopo distinto potrebbe aumentare la specificità.
• La prevista reattività crociata con HIF1AN murino è supportata, ma le prestazioni devono essere confermate utilizzando gli appropriati estratti tissutali o cellulari.
• Le diluizioni ottimali dell'anticorpo e le condizioni del saggio devono essere determinate empiricamente per ogni sistema sperimentale.

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