Anticorpo policlonale di coniglio anti-istone H2AX per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P16104

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'istone H2AX

• L'istone H2AX è una variante dell'istone nucleosomico H2A che sostituisce l'H2A convenzionale in una parte dei nucleosomi.
• Svolge un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica, controllando l'accessibilità del DNA.
• È necessario per l'arresto del ciclo cellulare mediato dai checkpoint in risposta a basse dosi di radiazioni ionizzanti e per la riparazione efficiente delle rotture a doppio filamento del DNA (DSB) quando viene fosforilato nella sua coda C-terminale.
• Si localizza nel nucleo e nella cromatina; viene rapidamente reclutato nei siti di danno del DNA, formando foci di γ-H2AX.
• È soggetto a diverse modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione, contribuendo al codice istonico.
• È coinvolto nelle interazioni ospite-virus e nella meiosi, evidenziando le sue diverse funzioni biologiche.
• È noto anche come H2A.X, H2A/X e H2AFX, codificato dal gene H2AX sul cromosoma 11 umano.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 50-143) è rivolto contro una regione altamente conservata, pertanto è prevista un'ampia reattività crociata tra specie; validare sempre nel proprio sistema campione.
• Per il WB, prevedere una banda a circa 15 kDa; utilizzare estratti nucleari o lisati cellulari totali da cellule trattate con agenti che danneggiano il DNA (ad es. radiazioni ionizzanti, etoposide) per valutare il rilevamento fosfo-specifico.
• Per IHC-P e IF/ICC, ottimizzare il recupero antigenico e la colorazione nucleare; i controlli positivi includono tessuti o cellule esposti a danno del DNA.
• Per l'ELISA, considerare l'utilizzo di una proteina H2AX ricombinante o del rivestimento con peptide ed eseguire saggi di legame competitivo per confermare la specificità.
• La titolazione e l'ottimizzazione del protocollo sono essenziali per ogni applicazione; iniziare dalle diluizioni raccomandate e modificarle secondo necessità.

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