Anticorpo policlonale coniglio anti-Histone H3 per WB, IP, IF-P, IHC-P, ELISA - Q16695 / P68431

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3.1t (H3.4)

• Componente principale del nucleosoma: L'istone H3.1t è una variante dell'istone H3 che funge da componente principale del nucleosoma, avvolgendo e compattando il DNA nella cromatina. Ciò limita l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari e svolge quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica.
• Regolazione del codice degli istoni: L'accessibilità del DNA è regolata attraverso un complesso insieme di modifiche post-traduzionali sugli istoni, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione, ADP-ribosilazione, idrossilazione e ubiquitinazione, collettivamente denominate codice degli istoni. Queste modifiche sono critiche per la regolazione epigenetica.
• Famiglia genica ed espressione: Appartenente alla famiglia degli istoni H3, questa variante (codificata dal gene H3-4, noto anche come HIST3H3) è espressa specificamente nelle cellule testicolari, suggerendo un ruolo nella riorganizzazione della cromatina durante la spermatogenesi.
• Localizzazione subcellulare: H3.1t si localizza nel nucleo e nei cromosomi, dove fa parte della particella centrale del nucleosoma.
• Caratteristiche strutturali: La proteina contiene domini di legame al DNA e può essere modificata dalla formazione di legami isopeptidici e dalla coniugazione simile all'ubiquitina, influenzando la dinamica del nucleosoma e la struttura della cromatina di ordine superiore.
• Parole chiave: struttura-3D, Acetilazione, ADP-ribosilazione, Cromosoma, Citrullinazione, Legame al DNA, Idrossilazione, Legame isopeptidico, Metilazione, Nucleo centrale, Nucleo, Fosfoproteina, Identificazione proteomica, Proteoma di riferimento, Coniugazione Ubl.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Design dell'immunogeno: L'anticorpo è stato sviluppato contro un peptide sintetico corrispondente a una regione centrale (aa 36-136) dell'istone H3.1t umana. Questa regione è altamente conservata tra le varianti H3 e tra le specie, il che potrebbe spiegare l'ampia reattività crociata prevista. I ricercatori dovrebbero validare la specificità per la loro variante bersaglio nel contesto biologico pertinente.
• Western blotting: È prevista una banda specifica a circa 15 kDa. Per migliorare il rilevamento, utilizzare estratti nucleari o istoni estratti con acido, poiché queste frazioni sono arricchite di istoni. Considerare il test sia in condizioni di gel denaturanti che nativi.
• Immunoprecipitazione e immunofluorescenza: Per l'IP, il cross-linking o le condizioni native possono influenzare l'accessibilità dell'anticorpo a causa della compattazione della cromatina. Per l'IF-P, sono tipicamente richiesti passaggi di permeabilizzazione (es. Triton X-100) per rilevare gli istoni nucleari. Validare in linee cellulari positive e negative.
• IHC-P ed ELISA: Per l'immunoistochimica, i metodi di recupero dell'antigene (indotti dal calore o enzimatici) possono migliorare l'esposizione dell'epitopo. Nell'ELISA, il peptide o la proteina ricombinante dovrebbero essere utilizzati per confermare la reattività. Includere sempre i controlli appropriati.

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