Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Istona H3.3 per WB, IHC-P, ELISA, ChIP, ChIP-seq - P84243

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Istona H3.3

• Variante di istona H3 che sostituisce la H3 convenzionale nei nucleosomi presso i geni trascritti attivamente, rappresentando la forma predominante di H3 nelle cellule non in divisione e depositandosi indipendentemente dalla sintesi del DNA
• Componente centrale dei nucleosomi, avvolge e compatta il DNA nella cromatina per limitare l'accessibilità del stampo; è quindi centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica
• Sottoposta a una complessa serie di modifiche post-traduzionali (acetilazioni, metilazioni, fosforilazioni, ecc.) che costituiscono il codice istonico, regolando la dinamica della cromatina e l'espressione genica
• Si localizza esclusivamente nel nucleo e nei cromosomi, arricchendosi nelle regioni di spostamento nucleosomico lungo i corpi genici, contrassegnando la cromatina trascrizionalmente attiva
• È codificata da due geni, H3-3A (H3F3A) e H3-3B (H3F3B), che producono prodotti proteici identici; è distinta dalle varianti canoniche di H3 dipendenti dalla replicazione
• È associata a varianti patologiche legate a disabilità intellettiva e disturbi dello sviluppo, a conferma del suo ruolo epigenetico fondamentale
• Estremamente conservata nei vertebrati, con un peso molecolare previsto di circa 15.328 Da, anche se in SDS-PAGE si osserva spesso una migrazione intorno a 15–17 kDa a causa delle modifiche post-traduzionali

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre gli aminoacidi 57–136 dell'Istona H3.3 umana, una regione coinvolta nelle interazioni con il nucleosoma; questo epitopo può essere conformazionalmente sensibile: si consiglia di testare sia in condizioni native sia denaturanti.
• Per la WB è prevista una banda intorno a 15 kDa; validare nel proprio sistema di campioni specifico e utilizzare controlli di caricamento appropriati (ad esempio, H3 totale o proteine housekeeping).
• Dato la reattività crociata riportata con Uomo, Topo, Ratto e un'ampia gamma di altre specie, è consigliabile un test pilota nei modelli non standard.
• Nell'ambito di ChIP e ChIP-seq, ottimizzare le condizioni di reticolazione e shearing; le prestazioni dell'anticorpo devono essere verificate con regioni di controllo positive (gene attivo) e negative (locus silente).
• Per IHC-P, il recupero dell'antigene e la diluizione dell'anticorpo devono essere determinati empiricamente; è previsto un pattern di colorazione nucleare.

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