Anticorpoiale policlonale Anti-HLA Classe 1 ABC per WB, IHC-P, ELISA - P04439 / P01889 / P10321

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'HLA Classe 1 ABC

• La catena alfa di classe I HLA (HLA-A, -B, -C) costituisce la catena pesante della molecola di classe I del complesso maggiore di istocompatibilità classico (MHCI). Si associa in modo non covalente alla beta-2 microglobulina (B2M) per presentare peptidi intracellulari processati sulla superficie cellulare per la sorveglianza immunitaria.
• In complesso con B2M, le molecole di classe I HLA mostrano principalmente peptidi virali e derivati da tumori (8-13 residui) ai recettori delle cellule T alfa-beta (TCR) sulle cellule T CD8+, guidando risposte delle cellule T citotossiche antigene-specifiche per eliminare cellule infette o trasformate. Riferimenti correlati: PMID:10449296, PMID:12138174, PMID:12393434
• Inoltre, le molecole di classe I HLA presentano peptidi self derivati dalle sequenze di segnale delle proteine secretorie o di membrana, contribuendo alla tolleranza delle cellule T e alla prevenzione dell'autoimmunità. Riferimenti correlati: PMID:25880248, PMID:7506728, PMID:7679507
• Gli alleli HLA altamente polimorfici determinano i motivi di legame dei peptidi; ad esempio, HLA-A*02:01 (l'allele più comune nelle popolazioni umane) presenta epitopi virali immunodominanti come la proteina matriciale IAV (GILGFVFTL) e HIV-1 gag-pol (ILKEPVHGV), caratterizzati da ancoraggi idrofobi in posizione 2 e al C-terminale.
• Le molecole di classe I HLA sono glicoproteine di membrana integrali localizzate sulla membrana cellulare e sulla membrana del reticolo endoplasmatico, dove avvengono il caricamento dei peptidi e il controllo di qualità.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, formazione di ponti disolfuro, fosforilazione e ubiquitinazione; queste regolano la stabilità, il traffico e il riconoscimento immunitario.
• Espressi ubiquitariamente in quasi tutte le cellule nucleate, le molecole di classe I HLA sono fondamentali per l'omeostasi del sistema immunitario e la discriminazione self/non-self.
• Gli anticorpi in questo prodotto mirano a una regione N-terminale conservata (aa 1-100) comune a HLA-A, HLA-B e HLA-C, consentendo un ampio riconoscimento delle molecole di classe I MHC classiche.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Design dell'immunogeno: L'immunogeno corrisponde a un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1-100 di HLA-A, -B e -C umani (basato su NP_001229687.1). Questa regione N-terminale include il dominio extracellulare di legame del peptide, garantendo la reattività con tutte e tre le molecole di classe I MHC classiche. Per la discriminazione di alleli specifici, considerare l'uso di anticorpi specifici per l'allelo.
• Western blotting (WB): In condizioni riducenti, è prevista una banda intorno ai 40 kDa. Validare in lisati cellulari umani appropriati (es. linfociti, linee cellulari tumorali) con profili di espressione HLA noti.
• Immunochimica (IHC-P): A causa della natura transmembrana del bersaglio, il recupero dell'antigene utilizzando il recupero dell'epitopo indotto dal calore (HIER) in tampone citrato (pH 6,0) può migliorare il rilevamento. Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo utilizzando tessuti di controllo positivi (es. tonsilla, milza) e negativi.
• ELISA: Adatto per ELISA diretto o a sandwich; abbinare con anticorpi di rilevamento che riconoscono la beta-2 microglobulina o alleli HLA specifici. Validare con proteine HLA ricombinanti o complessi naturali di classe I MHC.

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