Anticorpo monoclonale di coniglio anti-HLA-DPB1 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P04440

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di HLA-DPB1

• HLA-DPB1 è la catena beta dell'antigene di istocompatibilità di classe II HLA, una glicoproteina transmembrana eterodimerica che svolge un ruolo centrale nella risposta immunitaria adattativa presentando peptidi antigenici esogeni alle cellule T CD4+. I peptidi processati, tipicamente lunghi 10-30 residui, vengono caricati sulle molecole MHC di classe II all'interno del sistema endosomiale/lisosomiale.
• La molecola MHC di classe II funzionale è assemblata come un eterononamero costituito da tre eterodimeri alfa-beta associati a un trimero di catena invariante (CD74). Una volta entrata nella via endosomiale, la CD74 viene progressivamente scissa da proteasi come la catepsina S (CTSS) e la catepsina L (CTSL), lasciando un peptide CLIP residuo nel solco di legame, che viene poi scambiato con peptidi antigenici ad alta affinità con l'assistenza dell'editor peptidico HLA-DM.
• Il processo di caricamento dell'antigene avviene in un compartimento specializzato di endosomi tardivi/lisosomi, dove il microambiente acido facilita sia la proteolisi degli antigeni internalizzati che la reazione di scambio peptidico. Nelle cellule B, questo processo è ulteriormente modulato da HLA-DO, che regola l'attività di HLA-DM.
• HLA-DPB1 è un membro della famiglia genica delle catene beta del MHC di classe II e si mappa sul locus HLA-DP sul cromosoma 6. Altri nomi includono DPB1, HLA-DP, HLA-DPB e HLA-DP1B.
• A livello subcellulare, HLA-DPB1 transita attraverso il reticolo endoplasmatico e l'apparato di Golgi prima di raggiungere la superficie cellulare. Viene anche rilevato negli endosomi, nei lisosomi e nella rete trans-Golgi, riflettendo il suo routing intracellulare dinamico durante il caricamento peptidico e l'espressione superficiale.
• La proteina è classificata come una glicoproteina transmembrana con un peptide segnale, una singola elica transmembrana e legami disolfuro. Subisce glicosilazione N-linked ed è un membro della superfamiglia delle immunoglobuline.
• Le molecole MHC di classe II, inclusa HLA-DPB1, sono espresse costitutivamente su cellule presentanti l'antigene professionali come cellule dendritiche, cellule B e macrofagi, ma possono anche essere indotte su altri tipi cellulari, comprese le cellule epiteliali intestinali, dove partecipano all'immunità mucosale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo è un peptide sintetico che copre i residui 1-100 dell'HLA-DPB1 umano, corrispondente alla regione extracellulare N‑terminale. Questa regione include il peptide segnale e parte del dominio β1, che è coinvolto nel legame del peptide e nella formazione dell'eterodimero MHC II. Considerare di validare l'accessibilità dell'epitopo in condizioni native rispetto a denaturanti per la tua specifica applicazione.
• Per il Western blotting, ci si aspetta una banda che migra a circa 29 kDa in condizioni riducenti. A causa della glicosilazione e della formazione di complessi proteici, potrebbero essere osservate anche specie di peso molecolare più elevato. Ottimizzare le condizioni di blocco e lavaggio per minimizzare il legame aspecifico in lisati complessi.
• Nell'immunofluorescenza (IF-P) e nell'immunoistochimica (IHC-P), l'anticorpo mira a un antigene associato alla membrana. Il recupero dell'antigene utilizzando un buffer citrato a mediazione termica (pH 6.0) è spesso benefico per sezioni fissate in formalina e incluse in paraffina. Includere controlli isotipo appropriati e controlli positivi specifici per tessuto, come tonsilla o linfonodo, dove HLA-DPB1 è altamente espresso.
• Questo anticorpo mostra reattività crociata con topo e ratto, indicando il riconoscimento di un epitopo conservato. Quando si utilizzano campioni di roditori, tenere conto delle possibili differenze nella distribuzione dei tipi cellulari MHC di classe II e nei livelli di espressione. Si raccomandano esperimenti pilota per confermare l'idoneità nel tuo sistema modello.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento contro HLA-DPB1 ricombinante o nativo. L'abbinamento con un anticorpo anti‑catena alfa HLA‑DP può aiutare a garantire il rilevamento dell'eterodimero intatto. Convalidare il saggio nella matrice del campione rilevante per escludere interferenze da HLA solubili o molecole MHC di classe I cross‑reattive.

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