Anticorpo monoclonale di coniglio anti-HLA-DR per WB, IF/ICC, ELISA - P01903

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di HLA-DR

• Il gene HLA-DRA codifica la catena alfa dell'antigene di istocompatibilità HLA di classe II DR, che si appaia con la catena beta (HLA-DRB) per formare la molecola MHC di classe II funzionale sulle cellule presentanti l'antigene.
• Il complesso MHCII presenta peptidi antigenici extracellulari (generalmente di 10-30 amminoacidi) alle cellule T CD4-positive, guidando le funzioni effettrici dei linfociti T helper che promuovono l'immunità mediata da anticorpi e l'attivazione dei macrofagi.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15265931, PMID:15322540, PMID:17334368
• Nel microambiente tumorale, HLA-DR presenta peptidi derivati da cellule tumorali apoptotiche fagocitate o da proteine tumorali secrete internalizzate tramite macropinocitosi, collegandosi così alla sorveglianza immunitaria del cancro.
  Riferimenti correlati:
  PMID:31495665
• HLA-DR presenta anche peptidi provenienti dagli autofagolisosomi dopo macroautofagia, un processo fondamentale per la selezione delle cellule T timiche e la tolleranza immunitaria centrale.
  Riferimenti correlati:
  PMID:17182262, PMID:23783831
• La selezione degli epitopi immunodominanti da parte di MHCII segue due distinti percorsi di elaborazione: «prima legare, poi tagliare/rifinire» per i peptidi derivati da patogeni e «prima tagliare, poi legare» per i peptidi self.
  Riferimenti correlati:
  PMID:25413013
• Un grande residuo ancora idrofobico in posizione 1 del peptide è essenziale per l'interazione ad alta affinità con il solco di legame di MHCII.
  Riferimenti correlati:
  PMID:8145819
• A livello subcellulare, HLA-DR risiede sulla membrana cellulare, ma viene anche trasportato attraverso il reticolo endoplasmatico e i compartimenti endosomiali/lisosomiali, inclusi gli endosomi precoci e tardivi, i lisosomi e gli autofagolisosomi.
• È espresso prevalentemente nelle cellule professionali presentanti l'antigene — macrofagi, cellule dendritiche e cellule B — nonché nelle cellule epiteliali timiche, dove media l'educazione delle cellule T.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15322540, PMID:23783831, PMID:31495665
• Le principali caratteristiche strutturali includono un peptide segnale, una singola elica transmembrana, ponti disolfuro e glicosilazione legata all'N; è inoltre soggetto a ubiquitinazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno ricombinante comprende gli amminoacidi 26–126 di HLA-DRA umano, coprendo il dominio extracellulare N-terminale; questa regione è meno polimorfica rispetto alla catena beta e può conferire un'ampia reattività contro gli alleli HLA-DR, ma si raccomanda la validazione nel sistema cellulare target.
• Per il western blot, in condizioni riducenti è prevista una banda a circa 29 kDa; si consiglia di utilizzare linee cellulari derivate da APC umane (ad es. Raji, THP-1 differenziate) o tessuti con elevata espressione di MHCII come controlli positivi.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, i protocolli di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzati, poiché il target è localizzato sulla membrana e può essere rilevato anche nei compartimenti intracellulari (endosomi/lisosomi). È consigliabile la co-colorazione con un marcatore di membrana.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere adatto come reagente di cattura o di rilevazione per HLA-DR solubile o per complessi peptide–MHC; le condizioni del test devono essere titolate per stabilire linearità e specificità.
• Si noti che la reattività crociata è stata riportata solo per l'uomo; la reattività crociata con altre specie non è garantita. Nell'adattamento a campioni di primati non umani, è necessario verificare l'omologia di sequenza.

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