Anticorpo monoclonale di coniglio anti-hnRNP K per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P61978

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di hnRNP K

• hnRNP K è una proteina principale di legame al pre-mRNA con elevata affinità per le sequenze poli(C), e svolge un ruolo centrale nel metabolismo dell'hnRNA, nello splicing e nella processazione dell'mRNA.
• È un mediatore critico della risposta al danno del DNA di p53/TP53, funziona sia come coattivatore trascrizionale (quando sumoilato) per geni come p21/CDKN1A sia come repressore attraverso interazioni con RNA non codificanti come lincRNA-p21, regolando quindi l'apoptosi e l'arresto del ciclo cellulare.
• Come parte di un complesso ribonucleoproteico contenente ZNF827, HNRNPL e circZNF827, hnRNP K regola negativamente la trascrizione dei geni coinvolti nella differenziazione neuronale (PubMed:33174841). Riferimenti correlati: PMID:33174841
• La proteina si localizza dinamicamente in più compartimenti subcellulari: nucleo, nucleoplasma, citoplasma e podosomi, in linea con i suoi ruoli nella processazione dell'RNA, nella segnalazione e nell'adesione cellulare.
• hnRNP K subisce estese modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione, metilazione, sumoilazione e glicosilazione, che modulano la sua attività, la sua localizzazione e le sue reti di interazione.
• Possiede attività di legame al DNA a singolo filamento ed è implicato nelle interazioni ospite-virus, evidenziando i suoi contributi multifaceted all'omeostasi cellulare e alla patogenesi.
• Lo splicing alternativo del pre-mRNA di HNRNPK genera più isoforme, anche se le loro distinzioni funzionali non sono completamente caratterizzate in questa sede.
• Le parole chiave di UniProt includono: processazione dell'mRNA, spliceosoma, regolazione della trascrizione, attivatore, repressore e disabilità intellettiva, sottolineando i suoi ampi ruoli regolatori nell'espressione genica e nella malattia.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1-100 dell'hnRNP K umano; l'allineamento della sequenza con gli ortologhi di topo e ratto mostra una significativa omologia, a supporto della reattività crociata riportata. Validare la specificità nella specie e nel tessuto di vostro interesse.
• Nel Western blot (WB) ci si aspetta una banda predominante intorno a 49-51 kDa; tuttavia, a causa delle estese modifiche post-traduzionali, si possono osservare più bande o leggere variazioni di massa. Utilizzare marcatori di peso molecolare adeguati e controlli positivi (ad esempio, lisati cellulari integrali di HeLa o HEK293).
• Per l'immunoistochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), analizzare i pattern di localizzazione subcellulare: aspettarsi una colorazione sia nucleare che citoplasmatica. Ottimizzare il recupero dell'antigene (ad esempio, tampone citrato pH 6.0) e le fasi di permeabilizzazione. Si consiglia di utilizzare marcatori di podosomi per studi di co-localizzazione.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può fungere da reagente di cattura o di rilevazione; tuttavia, le condizioni di saggio (tampone di rivestimento, bloccaggio, fasi di lavaggio) e l'abbinamento degli anticorpi devono essere determinati empiricamente.
• Dato il coinvolgimento di hnRNP K nella segnalazione di p53, la valutazione dei cambiamenti di espressione dopo induzione del danno del DNA (ad esempio, tramite doxorubicina o trattamento UV) può rappresentare una strategia di validazione funzionale.

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