Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Homer1 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q86YM7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: funzione e localizzazione di Homer1

• Homer1 è una proteina di scaffold della densità postsinaptica codificata dal gene HOMER1. Isoforme multiple (es. isoforme 1 e 3) sono prodotte tramite splicing alternativo, con l'isoforma 3 che agisce come regolatore negativo dominante.
• Si lega e reticola i recettori metabotropici del glutammato di gruppo I (GRM1 e GRM5) con proteine intracellulari come ITPR1, SHANK1 e SHANK3, accoppiando l'attivazione del recettore di superficie al rilascio di calcio intracellulare dal reticolo endoplasmatico.
• L'isoforma 1 regola il traffico e l'espressione superficiale di GRM5, mentre l'isoforma 3 compete dinamicamente con l'isoforma 1 per regolare finemente la funzione del glutammato metabotropico sinaptico e partecipa ai cambiamenti strutturali durante la plasticità neuronale a lungo termine e lo sviluppo.
• Attraverso la sua associazione con SHANK1, Homer1 forma un complesso di ordine superiore critico per l'integrità strutturale e funzionale delle spine dendritiche (per similarità).
• Oltre al sistema nervoso, Homer1 regola negativamente l'attivazione delle cellule T inibendo la via della calcineurina-NFAT, competendo con la calcineurina per il legame con la proteina NFAT e impedendo la defosforilazione e l'attivazione di NFAT. Riferimenti correlati: PMID:18218901
• A livello subcellulare, Homer1 è localizzato prevalentemente nel citoplasma, nella densità postsinaptica, nelle sinapsi eccitatorie e nelle spine dendritiche dei neuroni.
• La proteina è soggetta a modifiche post-traduzionali come acetilazione e fosforilazione, e contiene un dominio coiled-coil importante per la multimerizzazione.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 170–354, una regione che può includere sequenze coiled-coil o linker; l'anticorpo può riconoscere tutte le isoforme di Homer1 che condividono questo epitopo.
• Per il Western blot, utilizzare condizioni riducenti e un controllo positivo adatto come lisato di cervello umano o di ratto; la dimensione della banda attesa è di circa 40 kDa, sebbene la migrazione specifica per isoforma possa variare.
• Nell'immunofluorescenza e nell'immunoistochimica, ottimizzare i protocolli di fissazione/permeabilizzazione e, per le sezioni in paraffina, determinare le condizioni di recupero dell'antigene appropriate per preservare l'accessibilità dell'epitopo.
• Considerare la verifica della specificità dell'isoforma tramite knockdown con siRNA o costrutti specifici per l'isoforma se è necessaria una distinzione tra Homer1A, Homer1B e Homer1C.
• Le prestazioni dell'anticorpo in ELISA possono essere valutate utilizzando la proteina Homer1 ricombinante o lisati cellulari, prestando attenzione alla composizione del buffer di bloccaggio e di lavaggio per ridurre il legame aspecifico.

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