Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-HPRT1 per WB ed ELISA - P00492

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di HPRT1

• L'ipoxantina-guanina fosforibosiltransferasi (HPRT1) catalizza la conversione dell'ipoxantina in IMP e della guanina in GMP tramite la via di salvataggio delle purine, riciclando le basi puriniche in nucleotidi.
• L'HPRT1 trasferisce il gruppo 5-fosforibosile dal 5-fosforibosilpirofosfato (PRPP) alle basi puriniche, giocando un ruolo centrale nella generazione di nucleotidi purinici per la sintesi degli acidi nucleici e l'energetica cellulare.
• L'HPRT1 è un membro della famiglia delle fosforibosiltransferasi puriniche/pirimidiniche, conservata attraverso le specie, ed è codificata dal gene HPRT1 (HGPRT) sul cromosoma X.
• A livello subcellulare, l'HPRT1 si localizza principalmente nel citoplasma, dove accede ai suoi substrati per le reazioni di salvataggio.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione e formazione di legami isopeptidici (ubiquitinazione), che possono regolare la sua attività o stabilità.
• Le mutazioni nell'HPRT1 causano la sindrome di Lesch-Nyhan, un grave disturbo neurologico, e sono associate alla gotta a causa della sovrapproduzione di purine derivante da un deficit del salvataggio.
• L'enzima richiede magnesio come cofattore e lega i nucleotidi, riflettendo il suo ruolo nel trasferimento fosforibosilico.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Il design dell'immunogeno basato su una regione centrale dell'HPRT1 (aa 119-218) può fornire specificità per il bersaglio evitando la variabilità N-terminale o C-terminale. Si consiglia di testare nelle specie pertinenti (umano, topo, ratto) a causa dell'alta conservazione della sequenza.
• Per il Western blot, la banda attesa è di circa 25 kDa; utilizzare marcatori di peso molecolare appropriati. Se è richiesta la validazione per knockout, includere lisati cellulari HPRT1 KO per confermare la specificità.
• Nell'ELISA, può essere impiegato un saggio indiretto standard con il peptide o la proteina ricombinante HPRT1; considerare l'ottimizzazione delle condizioni di rivestimento e della diluuzione dell'anticorpo.
Dato che l'HPRT1 è ubiquitaria, confermare l'espressione nel tipo di campione; può servire come controllo di carico in alcuni esperimenti.
• La reattività incrociata con l'HPRT1 di topo e ratto consente studi traslazionali; validare nel sistema modello desiderato.

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