Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-HSPA4 per WB, IHC-P, ELISA - P34932

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di HSPA4

• HSPA4 (Heat shock 70 kDa protein 4) è nota anche come HSP70RY, APG-2 e membro 2 della famiglia delle proteine da shock termico H. È codificata dal gene HSPA4 (indicato anche come APG2 o HSPH2) sul cromosoma umano 5.
• Come membro della famiglia Hsp70, HSPA4 presenta un dominio ATPasi altamente conservato e un dominio di legame del substrato, che le consentono di funzionare come chaperone molecolare dipendente da ATP coinvolto nel ripiegamento proteico e nella risposta allo stress.
• La proteina contiene motivi di legame dei nucleotidi, coerenti con la sua capacità di legare l'ATP, essenziale per il suo ciclo di chaperone e l'interazione con le co-chaperone.
• Studi sulla localizzazione subcellulare indicano che HSPA4 è prevalentemente citoplasmatica, dove esercita le sue funzioni di chaperone sia in condizioni normali che di stress.
• Le modifiche post-traduzionali di HSPA4 includono acetilazione, fosforilazione e metilazione, che possono regolare la sua attività, stabilità o interazioni proteina-proteina.
• Lo splicing alternato del trascritto HSPA4 dà origine a multiple isoforme, potenzialmente espandendo la sua diversità funzionale in diversi contesti cellulari.
• HSPA4 è classificata come proteina di risposta allo stress e la sua espressione è probabilmente aumentata in condizioni di stress cellulare per prevenire l'aggregazione proteica e mantenere la proteostasi.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato per questo anticorpo è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 700-800 di HSPA4 umana (P34932). Questa regione risiede nel dominio C-terminale, che è meno conservato tra i membri della famiglia Hsp70 e può conferire specificità per il bersaglio.
• Per applicazioni di Western blot (WB), considerare l'utilizzo di un protocollo standard SDS-PAGE denaturante con una scala proteica che copra l'intervallo di 94 kDa. Ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare e convalidare il rilevamento con controlli positivi appropriati (es. lisati di HeLa o HEK293).
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), i metodi di recupero dell'antigene (es. recupero dell'epitopo indotto dal calore a pH 6 o 9) e le diluizioni dell'anticorpo dovrebbero essere ottimizzati empiricamente per ogni tipo di tessuto per ridurre il rumore di fondo e ottenere una colorazione specifica.
• Per ELISA, assicurarsi che l'antigene di rivestimento e la coppia di anticorpi di rilevamento siano stati testati accuratamente ed eseguire titrazioni a scacchiera per stabilire le concentrazioni di lavoro ottimali.
• Poiché questo anticorpo è generato contro un immunogeno peptidico, può riconoscere epitopi lineari esposti in condizioni denaturanti (es. WB) ma potrebbe richiedere validazione in saggi conformazionali nativi.

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