Anticorpo Monoclonale Anti-CD59 Umano per Citometria a Flusso - P13987

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD59

• CD59, nota anche come protectina, proteina inibitrice del MAC (MAC-IP), fattore di restrizione omologo da 20 kDa (HRF-20) e antigene 1F5, è una glicoproteina di superficie cellulare ancorata al GPI che agisce come inibitore critico del complesso di attacco alla membrana del complemento (MAC).
• Si lega alla componente C8 (C8A e C8B) del MAC in fase di assemblaggio, formando un foglio beta intermolecolare che impedisce l'incorporazione di più molecole di C9, bloccando così la formazione del poro osmolitico e proteggendo le cellule umane dalla lisi mediata dal complemento (PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260). Riferimenti correlati: PMID:11882685, PMID:1698710, PMID:2475111, PMID:36797260
• Una forma solubile di CD59, presente nelle urine, conserva l'attività di legame al complemento ma mostra una capacità notevolmente ridotta di inibire l'assemblaggio del MAC sulle membrane cellulari.
• La proteina è localizzata sulla membrana cellulare tramite un ancoraggio GPI; è stata anche rilevata una forma secreta.
• CD59 subisce splicing alternativo e modificazioni post-traduzionali tra cui formazione di ponti disolfuro, glicazione e glicosilazione N-linked; le mutazioni nel gene CD59 sono associate all'anemia emolitica ereditaria.
• La massa molecolare prevista di CD59 è 14177 Da, coerente con la migrazione osservata a ~14–18 kDa su SDS-PAGE.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende il dominio extracellulare (aa 26–101) della CD59 umana, che include i siti funzionali chiave per il legame al MAC; questo progetto può favorire il riconoscimento di conformazioni native e correttamente ripiegate.
• Per la citometria a flusso, consigliamo di utilizzare cellule vive e non fissate per preservare la CD59 ancorata al GPI sulla superficie cellulare; si raccomanda il blocco dei recettori Fc per minimizzare il legame non specifico.
• Titrare l'anticorpo nelle vostre condizioni sperimentali specifiche per determinare la diluizione ottimale; proteggere il coniugato dalla luce ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere la stabilità del fluoroforo.
• Convalidare la specificità utilizzando cellule CD59-positive (ad esempio leucociti) e controlli CD59-knockout o deficienti; una rilevazione complementare con un marcatore di ancoraggio al GPI può confermare la localizzazione membranale.

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