Anticorpo Policlonale Anti-Parkin Umano per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O60260

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Background Biologico: Funzione e Localizzazione di Parkin

• Parkin, codificato dal gene PRKN (PARK2), è una ubiquitina-proteina ligasi E3 che funziona all'interno di un complesso multiproteico per catalizzare l'attacco covalente di porzioni di ubiquitina alle proteine substrato, mediando processi cellulari tra cui la degradazione proteica, il controllo della qualità mitocondriale e la sopravvivenza cellulare. Riferimenti correlati: PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533

• Parkin ubiquitina una vasta gamma di substrati, tra cui SYT11, VDAC1, BCL2, CCNE1, GPR37, RHOT1/MIRO1, MFN1, MFN2, SNCAIP, TOMM20 e ZNF746; può mediare la monoubiquitinazione nonché vari legami di catena poliubiquitinica (Lis-6, Lis-11, Lis-48, Lis-63) a seconda del contesto cellulare. Riferimenti correlati: PMID:29311685, PMID:32047033, PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533, PMID:19229105, PMID:20889974, PMID:25474007

• Una funzione chiave di Parkin è mantenere l'integrità mitocondriale; in seguito a danno mitocondriale, la fosforilazione mediata da PINK1 recluta Parkin sulla membrana mitocondriale esterna, dove ubiquitina le proteine per promuovere la mitofagia e la fissione mitocondriale, eliminando così gli organelli disfunzionali. Riferimenti correlati: PMID:11439185, PMID:18957282, PMID:19029340, PMID:24660806, PMID:24784582, PMID:25474007

• Parkin ubiquitina direttamente le proteine della membrana esterna mitocondriale come TOMM20, MFN1, MFN2, MIRO1 e USP30, innescando la mitofagia e impedendo la fusione dei mitocondri danneggiati con le reti sane; regola anche la motilità mitocondriale tramite la degradazione di MIRO1. Riferimenti correlati: PMID:19029340, PMID:19966284, PMID:21753002, PMID:22396657, PMID:23620051

• Oltre alla mitofagia, Parkin protegge le cellule dall'apoptosi monoubiquitinando BCL2 per promuovere l'autofagia, limitando l'afflusso di calcio mitocondriale e reprimendo trascrizionalmente p53; può anche funzionare come oncosoppressore. Riferimenti correlati: PMID:20889974, PMID:19801972, PMID:32047033, PMID:12719539, PMID:11439185

• Le mutazioni omozigoti o eterozigoti composte in PRKN sono una causa principale della malattia di Parkinson giovanile autosomica recessiva (PDJ); Parkin è altamente espresso nel cervello, in particolare nella substantia nigra, e i suoi livelli sono ridotti nel cervello dei pazienti PARK2 e in molti tumori. Riferimenti correlati: PMID:9560156, PMID:12719539, PMID:14614460, PMID:19501131

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre i 387 amminoacidi N-terminali di Parkin umano, ciò suggerisce che l'anticorpo può riconoscere più epitopi e rilevare sia Parkin endogeno che la proteina ricombinante.
• Per Western blot, ci si aspetta una banda intorno a 52 kDa; tuttavia, possono comparire bande minori a causa di modifiche post-traduzionali o isoforme, e si raccomanda di includere controlli appropriati (ad es., lisati di knockout per Parkin).
• Data la reattività incrociata con topo e ratto, questo anticorpo può essere adatto per studiare Parkin in modelli di roditori della malattia di Parkinson; si consiglia di validare l'anticorpo nel tuo specifico sistema tissutale o cellulare utilizzando IHC-P o IF/ICC, con co-colorazione per marcatori mitocondriali.
• Le diluizioni e le condizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente per ogni applicazione; per gli anticorpi policlonali sono comunemente utilizzate diluizioni iniziali di 1:500-1:2000 per WB, 1:50-1:200 per IHC-P e 1:50-1:200 per IF/ICC.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come anticorpo di cattura o di rilevamento se abbinato a un anticorpo secondario appropriato; le prestazioni possono variare in base alla presentazione dell'antigene.

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