Anticorpo policlonale di coniglio anti-Ikaros per WB - Q13422

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di Ikaros

• La proteina legante il DNA Ikaros (IKZF1) è un fattore di trascrizione con dita di zinco appartenente alla famiglia Ikaros, codificato dal gene IKZF1 (noto anche come LYF1, ZNFN1A1). È un regolatore chiave della differenziazione delle cellule ematopoietiche (PubMed:17934067). Riferimenti correlati: PMID:17934067
• Ikaros si lega al DNA gamma-satellite, contribuendo alla regolazione della struttura della cromatina e dell'espressione genica (PubMed:17135265, PubMed:19141594). Riferimenti correlati: PMID:17135265 | PMID:19141594
• Svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo dei linfociti, comprese le cellule B e T, legandosi all'enhancer del gene CD3-delta e attivandolo, nonché reprimendo il gene TdT durante la differenziazione dei timociti.
• Attraverso l'associazione con complessi dipendenti e indipendenti da HDAC, Ikaros regola la trascrizione e indirizza i complessi di rimodellamento della cromatina NuRD e BAF (SWI/SNF) al locus della beta-globina negli eritrociti adulti tramite il complesso PYR.
• Ikaros aumenta l'apoptosi fisiologica nelle cellule eritroidi adulte e conferisce una competenza temporale precoce alle cellule progenitrici retiniche (RPC) (per analogia).
• La funzione di Ikaros è specifica dell'isoforma ed è modulata da isoforme inattive con effetto dominante negativo (PubMed:17135265, PubMed:17934067). Riferimenti correlati: PMID:17135265 | PMID:17934067
• La localizzazione subcellulare è principalmente nucleare, ma la proteina può essere presente anche nel citoplasma. L'espressione tissutale è abbondante nel timo, nella milza, nei leucociti del sangue periferico e nei linfonodi, mentre è più bassa nel midollo osseo e nell'intestino tenue.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione e la formazione di legami isopeptidici; la proteina contiene numerose dita di zinco di tipo C2H2 essenziali per il legame al DNA.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-270) di Ikaros umano e comprende domini funzionali chiave; questo design può consentire il riconoscimento di più isoforme che condividono questa sequenza. Validare la specificità nel proprio sistema sperimentale utilizzando controlli appropriati, come campioni con knockdown o knockout di Ikaros.
• Per il Western blot (WB), si consiglia di utilizzare estratti nucleari di tessuti o linee cellulari linfoidi (ad esempio timo, milza, Jurkat), data l'abbondante espressione di Ikaros in questi campioni. Per la proteina a lunghezza intera è prevista una banda intorno a 58 kDa.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), Ikaros mostra una colorazione prevalentemente nucleare; assicurarsi di ottenere una permeabilizzazione adeguata e valutare la co-colorazione con un marcatore nucleare.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), verificare che l'anticorpo sia in grado di immunoprecipitare efficacemente i loci genomici legati a Ikaros. Ottimizzare le condizioni di cross-linking e sonicazione in base al tipo cellulare.
• È stato riportato che questo anticorpo reagisce anche con Ikaros di topo e ratto; tuttavia, si raccomanda un allineamento della sequenza del peptide immunogeno tra le diverse specie per confermare l'idoneità a questi modelli.

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