Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-IL1β per WB, IF/ICC, ELISA - P10749

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'IL1β

• L'interleuchina-1 beta (IL1β) è una potente citochina pro-infiammatoria appartenente alla famiglia dell'interleuchina-1, codificata dal gene Il1b nel mouse (Gene ID: 16176, UniProt P10749). La proteina è sintetizzata come un precursore di 31 kDa che viene scisso per generare una forma matura secreta.
• L'IL1β è stata inizialmente identificata come il principale pirogeno endogeno, capace di indurre febbre. Stimola la sintesi delle prostaglandine, promuove l'afflusso e l'attivazione dei neutrofili e regola sia le funzioni delle cellule T che delle cellule B, guidando le risposte immunitarie adattative.
• L'IL1β svolge un ruolo centrale nella cascata infiammatoria: agisce in sinergia con l'IL12 per indurre la produzione di interferone-gamma (IFNG) da parte delle cellule Th1 e promuove la differenziazione delle cellule Th17. Facilita anche l'angiogenesi inducendo la produzione di VEGF in combinazione con TNF e IL6.
• La forma matura dell'IL1β viene rilasciata extracellularmente tramite una via di secrezione non classica. Dopo l'attivazione dell'infosoma e la piroptosi, l'IL1β matura esce passivamente attraverso i pori della gasdermina-D (GSDMD) nella membrana plasmatica, collegando il sensing immunitario innato all'infiammazione.
• A livello subcellulare, l'IL1β si trova nel citosol, nei lisosomi ed è attivamente secreta. È anche associata agli esosomi extracellulari, indicando percorsi di secrezione multipli (UniProt: SUBCELLULAR LOCATION).
• L'espressione dell'IL1β è strettamente regolata e osservata prevalentemente nei macrofagi attivati a livello proteico, coerente con il suo ruolo nell'immunità innata (UniProt: TISSUE SPECIFICITY).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 118-269 del precursore di IL1β di topo (NP_032387.1), coprendo la regione dell'IL1β matura. L'anticorpo può riconoscere sia il precursore di ~31 kDa che la forma matura di ~17 kDa a seconda del campione e dello stato di attivazione. Si consiglia di eseguire marcatori di peso molecolare appropriati e controlli positivi (es. lisati di macrofagi stimolati con LPS) per identificare le bande specifiche.
• Per il western blot (WB), utilizzare una SDS-PAGE riducente e protocolli di trasferimento standard. È prevista una banda intorno ai 31 kDa per il precursore a lunghezza intera, mentre una banda a ~17 kDa può apparire nei campioni secreti o scissi.
• Nell'immunofluorescenza/ICC (IF/ICC), includere controlli di stimolazione (es. LPS ± ATP) per indurre l'espressione e la secrezione di IL1β, poiché i livelli basali possono essere bassi. La colorazione simultanea con marcatori di organelli può aiutare a visualizzare la sua localizzazione citosolica o secreta.
• Per l'ELISA, considerare l'abbinamento di questo anticorpo con un anticorpo di rilevamento adatto che riconosca un epitopo distinto se utilizzato come reagente di cattura. Validare il saggio con standard di IL1β di topo ricombinante e campioni biologici.
• La reattività crociata è confermata per il mouse; eseguire una validazione specifica per la specie se utilizzato su altre specie. L'IgG endogena di mouse può produrre background nei tessuti di mouse; l'uso di anticorpi secondari anti-coniglio e un blocco appropriato può mitigare questo problema.

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