Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'Insulin-degrading enzyme (IDE)

• L'insulin-degrading enzyme (IDE), noto anche come insulysina, insulina proteasi o proteasi che degrada Abeta, è una metalloproteasi zinco-dipendente altamente conservata coinvolta nella clearance di molteplici ormoni peptidici e molecole di segnalazione.
• L'IDE media la degradazione cellulare dell'insulina, del glucagone e del polipeptide amiloide delle isole pancreatiche (IAPP), svolgendo un ruolo fondamentale nella regolazione dell'omeostasi della glicemia. Bibliografia correlata: PMID:10684867 PMID:17051221 PMID:17613531
• L'IDE degrada i peptidi beta-amiloide (Abeta) derivati dalla proteina precursore dell'amiloide (APP), contribuendo alla clearance degli aggregati neurotossici associati alla malattia di Alzheimer. Bibliografia correlata: PMID:26394692 PMID:9830016
• Inattiva i peptidi natriuretici (ANP, BNP, CNP) mediante clivaggio, attenuando così la segnalazione mediata da cGMP; l'IDE processa anche una forma frame-shift associata alla malattia di NPPA, legata alla fibrillazione atriale familiare. Bibliografia correlata: PMID:21098034
• Il legame con il substrato induce grandi cambiamenti conformazionali nell'IDE, permettendo all'enzima di ospitare e degradare substrati più grandi come l'insulina. Bibliografia correlata: PMID:23922390 PMID:26394692 PMID:29596046
• L'IDE è coinvolto nel processing antigenico, generando gli estremi N-terminale e C-terminale del peptide derivato da MAGEA3 presentato dalle molecole MHC di classe I.
• L'enzima si localizza principalmente nel citosol, ma si trova anche sulla membrana cellulare e viene secreto; nel cervello è rilevato nei neuroni e nel liquido cerebrospinale.
• L'IDE agisce come enzima allosterico con capacità di legare l'ATP e funziona come recettore cellulare ospite per l'ingresso del virus varicella-zoster.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'anticorpo monoclonale di coniglio è prodotto contro un peptide sintetico corrispondente alla regione N-terminale (amminoacidi 1-100) dell'IDE umano; questo epitopo è altamente conservato in uomo, topo e ratto, in linea con la reattività incrociata riportata.
• Per l'analisi Western blot (WB), a causa del peso molecolare relativamente elevato dell'IDE (~118 kDa), si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale e tempi di trasferimento prolungati per garantire un'efficace separazione delle proteine e il trasferimento sulla membrana.
• Nelle applicazioni ELISA, validare le prestazioni dell'anticorpo in condizioni sia native che denaturanti per confermare la specificità per l'epitopo bersaglio e ottimizzare il rapporto segnale/rumore.
• Poiché l'IDE è espresso in più tessuti ed è particolarmente abbondante nel cervello e può essere secretato, può essere necessaria una preparazione appropriata del campione (ad esempio la concentrazione del liquido cerebrospinale) quando si analizzano fluidi fisiologici o supernatanti cellulari.

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