Anticorpo policlonale di coniglio anti-Irf3 per WB, IHC-P, ELISA - P70671

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di Irf3

• Il fattore regolatore dell'interferone 3 (Irf3) è un regolatore trascrizionale chiave delle risposte immunitarie innate dipendenti dall'interferone di tipo I (IFN) e svolge un ruolo cruciale nella difesa antivirale contro i virus a DNA e a RNA. Regola la trascrizione dei geni dell'IFN di tipo I (IFN-alfa e IFN-beta) e dei geni stimolati dall'IFN (ISG) legandosi agli elementi di risposta stimolati dall'interferone (ISRE) nei loro promotori, agendo come attivatore più potente di IFNB rispetto a IFNA. Riferimenti correlati:
  • PMID:15800576
  • PMID:39719712
• Nelle cellule non infette, Irf3 esiste come monomero citoplasmatico inattivo. In seguito a un'infezione virale, alla presenza di RNA a doppio filamento (dsRNA) o alla segnalazione dei recettori toll-like (TLR), viene fosforilato dalle chinasi IKBKE e TBK1, inducendo un cambiamento conformazionale che porta alla dimerizzazione, alla traslocazione nucleare e all'associazione con CREBBP per formare il complesso DRAF1, che attiva la trascrizione dei geni dell'IFN di tipo I e degli ISG. Irf3 può inoltre indurre l'apoptosi nei macrofagi primari. Riferimenti correlati:
  • PMID:16846591
  • PMID:16979567
  • PMID:20049431
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme di Irf3; una delle isoforme può agire come modulatore, riducendo l'attività trascrizionale dell'isoforma 1 competendo per il legame agli ISRE.
• La localizzazione subcellulare di Irf3 comprende il citoplasma, il nucleo e i mitocondri, riflettendo il suo trasferimento dinamico in seguito all'attivazione.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione (inclusi il legame isopeptidico e la coniugazione con Ubl), che ne regolano l'attività, la stabilità e le interazioni.
• Irf3 è ampiamente espresso nei tessuti, in linea con il suo ruolo esteso nell'immunità innata.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 100-200 di Irf3 murino; è probabile che questa regione centrale sia conservata tra le specie, a supporto della reattività crociata osservata con l'uomo e il ratto. Se utilizzato in altre specie, si consiglia di eseguire un allineamento di sequenza per verificare la conservazione dell'epitopo.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di 46 kDa. Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati, come lisati cellulari stimolati e non stimolati, per confermare la specificità.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), ottimizzare il recupero antigenico e la diluizione dell'anticorpo per ciascun tipo di tessuto. La rilevazione può essere migliorata nei tessuti con risposte immunitarie attivate.
• Per l'ELISA, validare l'anticorpo con la proteina Irf3 ricombinante o con campioni positivi noti. Abbinarlo a un anticorpo di rilevazione appropriato per lo sviluppo di un ELISA sandwich.
• Considerato il ruolo di Irf3 nell'immunità innata, si può prendere in considerazione la stimolazione delle cellule con mimetici virali (ad es. poly(I:C)) o interferoni per aumentare l'espressione del bersaglio e migliorare la rilevazione.

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