Anticorpo policlonale Anti-KAP1/TRIM28 per WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13263

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di KAP1/TRIM28

• Conosciuto anche come fattore intermediario di trascrizione 1-beta (TIF1-beta), proteina 1 associata a KRAB (KAP-1) o KRIP-1, questa proteina della famiglia dei motivi tripartiti (TRIM) di 88,6 kDa presenta regioni RING, B-box, coiled-coil, PHD e bromodominio.
• Funziona come E3 SUMO e ubiquitina ligasi che funge da scaffold per i complessi di repressione trascrizionale reclutando SETDB1 (istone metiltransferasi) e il complesso NuRD (rimodellazione dei nucleosomi e deacetilazione), portando alla metilazione di H3K9 e alla formazione dell'eterocromatina.
• Agisce come corepressore nucleare per le proteine a dita di zinco contenenti il dominio KRAB (KRAB-ZFP), mediando il silenziamento dei retrovirus endogeni e dei geni critici per lo sviluppo embrionale e l'imprinting genomico.
• Nelle cellule T regolatorie, collabora con l'isoforma 2 di ZFP90 per potenziare l'attività repressiva trascrizionale di FOXP3, essenziale per la funzione soppressiva dei Treg. Riferimenti correlati: PMID:23543754
• Mantiene uno stato di repressione trascrizionale nelle cellule staminali embrionali indifferenziate (ESC), preservando la pluripotenza e il potenziale di sviluppo iniziale. Riferimenti correlati: PMID:24623306
• Agisce come regolatore positivo della segnalazione dell'interferone di tipo I (IFN-I) mediando l'ubiquitinazione di TBK1 legata a Lys-63, facilitando la formazione del complesso TBK1-IRF3. Riferimenti correlati: PMID:38495890
• Regola l'immunità innata e l'infiammazione attraverso la SUMOilazione di mediatori chiave: la SUMOilazione di TRAF6 controlla il traffico nucleo-citoplasmatico e l'attivazione di NF-kappa-B, mentre la SUMOilazione di NLRP3 stabilizza l'infiammasoma e ne aumenta l'attivazione. Riferimenti correlati: PMID:39920527, PMID:34373456
• Si localizza prevalentemente nel nucleo ed è espresso ampiamente in tutti i tessuti umani, tra cui milza, timo, prostata, testicolo, ovaio, intestino tenue, colon e leucociti del sangue periferico.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre la regione C-terminale (aa 576-835) contenente i domini PHD e bromodominio; l'anticorpo policlonale risultante può riconoscere KAP1/TRIM28 a lunghezza intera e possibili varianti di splicing o forme modificate post-traduzionali.
• Per il Western blotting, è prevista una banda intorno agli 89 kDa (previsto 88,6 kDa); per una risoluzione ottimale utilizzare SDS-PAGE all'8–10% e validare il test su lisati di cellule umane, di topo o di ratto.
• Negli saggi di immunoprecipitazione, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo e le condizioni del buffer di lisi; il crosslinking dell'anticorpo alle sfere può migliorare la cattura e ridurre l'interferenza delle catene pesanti e leggere.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, è prevista una colorazione nucleare; utilizzare una fissazione appropriata (es. 4% PFA) e permeabilizzazione (es. 0,1% Triton X-100) e includere la colorazione concomitante con DAPI.
• Durante l'immunoistochimica (IHC-P), il recupero dell'antigene in tampone citrato (pH 6,0) è spesso vantaggioso; includere sempre controlli tissutali positivi e negativi per confermare la specificità.
• Per le applicazioni ELISA, in abbinamento a un anticorpo di rivelazione, determinare la concentrazione ottimale dell'antigene di rivestimento e le diluizioni dell'anticorpo in modo empirico utilizzando campioni noti positivi e negativi.

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