Anticorpo policlonale di coniglio Anti-KEAP1 per WB, IF/ICC, ELISA - Q14145

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di KEAP1

• KEAP1 (proteina 1 associata a ECH simile a Kelch), nota anche come INrf2 o KLHL19, funziona come adattatore specifico per substrato del complesso E3 ubiquitina ligasi BCR (BTB-CUL3-RBX1). Riferimenti correlati: PMID:14585973 PMID:15379550 PMID:15572695
• Agisce come un sensore redox critico: in condizioni basali indirizza il fattore di trascrizione NFE2L2/NRF2 all'ubiquitinazione e alla degradazione proteasomica, mantenendo così bassi livelli di espressione dei geni citoprotettivi. Riferimenti correlati: PMID:15601839 PMID:16006525
• In seguito a stress ossidativo o elettrofilo, i residui di cisteina reattivi in KEAP1 vengono modificati covalentemente, inattivando il complesso ligasi e permettendo a NRF2 di accumularsi nel nucleo e indurre l'espressione degli enzimi disintossicanti di fase II. Riferimenti correlati: PMID:16006525 PMID:17127771 PMID:18251510
• Le vie dell'autofagia selettiva che coinvolgono SQSTM1/p62 possono sequestrare KEAP1, portando all'attivazione di NRF2; il complesso BCR(KEAP1) ubichinizza anche SQSTM1/p62, promuovendo la propria degradazione. Riferimenti correlati: PMID:20452972 PMID:28380357
• Altri substrati del complesso BCR(KEAP1) includono BPTF e PGAM5, che ampliano il suo ruolo nella regolazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:15379550 PMID:17046835
• KEAP1 è prevalentemente citoplasmatica ma può anche localizzarsi nel nucleo, coerentemente con le sue funzioni regolatorie.
• È ampiamente espressa nei tessuti umani, con i livelli più alti osservati nel muscolo scheletrico.
• Le modifiche post-traduzionali includono S-nitrosilazione e ubiquitinazione; contiene domini a ripetizione Kelch critici per il riconoscimento del substrato.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto di KEAP1 è di circa 70 kDa; utilizzare controlli positivi appropriati da lisati di uomo, topo o ratto per confermare la specificità.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, si consiglia di ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per rilevare sia la frazione citoplasmatica che quella nucleare di KEAP1.
• Per applicazioni di ELISA sandwich, è consigliabile abbinare l'anticorpo a un anticorpo di cattura validato; validare la coppia di anticorpi nella matrice di campione pertinente.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti può variare; è consigliabile testare nuovi lotti in un esperimento pilota prima di studi su larga scala.

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