Anticorpo policlonale di coniglio anti-Ki67 per IF/ICC, ELISA - P46013

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di Ki67

• La proteina marcatore di proliferazione Ki-67 (MKI67) si associa alla superficie dei cromosomi mitotici e agisce sia come repellente cromosomico durante la mitosi precoce, sia come attrattore cromosomico durante la mitosi tardiva. Riferimenti correlati: PMID:27362226, PMID:32879492, PMID:35513709
• Durante la mitosi precoce, Ki-67 si rilocalizza dai nucleoli alla superficie cromosomica e forma strutture estese simili a spazzole che impediscono il collasso dei cromosomi fornendo una barriera di carica sterica ed elettrostatica. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• Durante l'anafase mitotica, la defosforilazione di Ki-67 e l'esposizione di una patch basica conservata inducono una separazione di fase liquido-liquido dipendente dall'RNA sulla superficie cromosomica, promuovendo il raggruppamento dei cromosomi e l'esclusione di grandi particelle citoplasmatiche dal futuro spazio nucleare. Riferimenti correlati: PMID:32879492, PMID:39153474, PMID:28935370
• Ki-67 si lega al DNA superavvolto e al DNA ricco di AT, così come agli RNA ribosomiali prematuri, il che contribuisce al suo ruolo nell'organizzazione e nel mantenimento dei cromosomi mitotici. Riferimenti correlati: PMID:10878551, PMID:24867636
• La proteina si localizza nei nuclei delle cellule in interfase, concentrandosi in particolare nei nucleoli, e si associa ai cromosomi mitotici durante la divisione cellulare (Localizzazione subcellulare: Cromosoma, Nucleo, Nucleolo).
• Ki-67 subisce molteplici modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e modifiche simili all'ubiquitinazione (legame isopeptidico, coniugazione Ubl), con la fosforilazione/defosforilazione che regola la sua associazione cromosomica e le proprietà di separazione di fase. Riferimenti correlati: PMID:39153474

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 700-800 di Ki67 umano; questa regione si trova all'interno del dominio ripetitivo centrale ed è probabilmente accessibile nella proteina nativa.
• Per IF/ICC, considerare l'ottimizzazione della fissazione e della permeabilizzazione cellulare per preservare la colorazione nucleolare e dei cromosomi mitotici. Cellule proliferanti come HeLa o Jurkat possono servire come controlli positivi.
• Per ELISA, convalidare la reattività dell'anticorpo utilizzando frammenti ricombinanti di Ki67 o lisati cellulari completi da cellule proliferanti rispetto a quelle quiescenti.
• Poiché l'anticorpo riconosce Ki67 umano, non è prevista una reattività crociata con altre specie a meno che non vi sia un'elevata omologia di sequenza nella regione dell'immunogeno.

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