PolymAb® Rabbit Anti-Ki67 (convalidazione KO) per WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - E9PVX6

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Ki67

• MKI67 (Ki-67) è un marcatore di proliferazione ben consolidato, espresso nel nucleo delle cellule in attiva divisione, i cui livelli di espressione sono strettamente correlati al ciclo cellulare.
• Si associa ai cromosomi mitotici durante la mitosi iniziale, formando una caratteristica struttura a pennello che agisce come barriera sterica ed elettrostatica per prevenire l'aggregazione cromosomica. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• L'elevata carica netta della Ki67 contribuisce alle sue proprietà simili a un tensioattivo, disperdendo i cromosomi e facilitandone la motilità indipendente. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• In anafase, la Ki67 cambia funzione diventando un attrattore cromosomico, promuovendo l'aggregazione cromosomica attraverso defosforilazione e separazione di fase liquida dipendente da RNA.
• Si lega al DNA, in particolare a sequenze superavvolte e ricche di AT, e interagisce con gli RNA ribosomiali prematuri per modulare l'organizzazione cromosomica.
• La Ki67 si localizza sulla superficie dei cromosomi, nel nucleolo e nel nucleo. Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione.
• La proteina ha un peso molecolare previsto di ~350 kDa; lo splicing alternativo genera varianti di 359 kDa.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico compreso tra gli amminoacidi 2271–2370; si consiglia di includere lisati cellulari KO positivi e negativi per la convalida nella tecnica WB.
• Per il WB, utilizzare un gel a bassa percentuale (ad es. 6–8%) e tempi di trasferimento prolungati, a causa delle grandi dimensioni della proteina (~350 kDa).
• Nell'IHC-P, la colorazione nucleare della Ki67 richiede un recupero efficace dell'antigene; comunemente si utilizza un tampone citrato (pH 6,0) con trattamento termico.
• Per IF/ICC, si raccomanda un passaggio di permeabilizzazione con 0,1–0,5% di Triton X-100 per accedere agli antigeni nucleari.
• Questo anticorpo è convalidato per studi su knockout; verificare la specificità nel vostro sistema modello confrontando campioni wild-type e KO.

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