Anticorpo monoclonale anti-KIR2DL2/KIR2DL3 per WB, IF/ICC, FC, ELISA - P43628

Specifiche principali del prodotto e parametri

Background biologico: funzione e localizzazione di KIR2DL2/KIR2DL3

• KIR2DL3 (Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3, noto anche come CD158b, recettore NK p58, NKAT2) è una glicoproteina transmembrana di tipo I appartenente alla famiglia KIR. Funge da recettore inibitorio sulle cellule natural killer (NK) per specifici allotipi HLA-C, inclusi HLA-Cw1, Cw3 e Cw7.
• Il recettore contiene due domini extracellulari di tipo C2 simili alle immunoglobuline, un'unica elica transmembrana e una coda citoplasmatica con motivi inibitori basati sulla tirosina dell'immunorecettore (ITIM) che reclutano fosfatasi per bloccare i segnali di attivazione.
• L'espressione di KIR2DL3 è in gran parte limitata alle cellule NK, dove media l'auto-tolleranza e monitora il "missing-self" attraverso il controllo dell'espressione di MHC di classe I sulle cellule bersaglio.
• L'interazione di KIR2DL3 con il suo ligando sopprime la citotossicità mediata dalle cellule NK, prevenendo la lisi delle cellule sane e consentendo al contempo l'uccisione delle cellule che hanno sovraregolato negativamente HLA-C.
• Il dominio extracellulare subisce glicosilazione N-linked e formazione di ponti disolfuro, contribuendo alle molteplici forme di peso molecolare osservate (~27 kDa non glicosilata e ~37–38 kDa glicosilata).
• KIR2DL2, codificato da un gene distinto, condivide circa il 96% di identità amminoacidica con KIR2DL3 e mostra una specificità HLA-C simile; l'immunogeno dell'anticorpo (aa 22-245 di KIR2DL3) copre una regione conservata tra entrambi i recettori, consentendo il rilevamento incrociato.
• Lo splicing alternativo del trascritto KIR2DL3 può produrre varianti con proprietà di legame al ligando o di segnalazione alterate, sebbene l'isoforma full-length sia la forma funzionale predominante.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blotting, attendersi bande intorno a 27 kDa (non glicosilata) e 37–38 kDa (forma glicosilata). Utilizzare condizioni riducenti e caricare lisati totali da linee cellulari NK KIR-positive (es. NK92, YTS) come controlli positivi. Considerare la deglicosilazione con PNGase F per semplificare il pattern delle bande.
• Poiché l'immunogeno copre il dominio extracellulare, l'anticorpo riconosce il recettore di superficie nativo; per la citometria a flusso e l'immunofluorescenza, non è necessaria la permeabilizzazione per la colorazione di superficie. Titolare l'anticorpo e includere un controllo isotipico per garantire la specificità su PBMC umani o cellule NK isolate.
• Per le applicazioni ELISA, questo anticorpo monoclonale può fungere da reagente di cattura o di rilevamento; se si costruisce un immunodosaggio a sandwich, accoppiarlo con un legante per un epitopo separato. Convalidare con proteina KIR2DL3 ricombinante o lisati cellulari.
• Confermare la reattività crociata verso KIR2DL2 testando in linee cellulari che esprimono ciascun recettore individualmente (es. trasfettanti 293T), data l'elevata omologia di sequenza.
• A causa del polimorfismo KIR, i pattern di colorazione possono variare tra i donatori; ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo per ogni applicazione e tipo cellulare.

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