Anticorpo policlonale anti-KLK6 per WB, ELISA - Q92876

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del KLK6

• La callicreina-6 (KLK6), nota anche come neurosin, proteasi M, SP59 o zima, è una proteasi serinica secreta codificata dal gene KLK6 (nomi alternativi PRSS18/PRSS9), appartenente alla famiglia delle callicreine tissutali.
• KLk6 cliva preferenzialmente i substrati con Arg in posizione P1 e Ser/Pro in P2, mostrando attività contro la proteina precursore dell'amiloide, la proteina basica della mielina, la gelatina, la caseina e le proteine della matrice extracellulare (fibronectina, laminina, vitronectina, collagene).
• La proteasi degrada l'alfa-sinucleina e inibisce la sua polimerizzazione, suggerendo un ruolo protettivo nelle sinucleinopatie come il morbo di Parkinson; la sua disregolazione potrebbe contribuire alla patogenesi.
• Nel sistema nervoso, KLK6 è implicata nella regolazione della crescita degli assoni dopo lesione del midollo spinale e si localizza nei neuroni della sostanza grigia dove colocalizza con inclusioni patologiche come i corpi di Lewy e le inclusioni citoplasmatiche gliali.
• Sovraespressa nei tumori mammari primari ma non nei tumori metastatici, KLK6 promuove l'invasione e la metastasi, poiché le cellule tumorali trattate con un anticorpo neutralizzante mostrano una migrazione ridotta.
• La localizzazione subcellulare include la secrezione, il nucleo/nucleolo, il citoplasma, i mitocondri e i microsomi.
• Le modifiche post-traduzionali comprendono glicosilazione, formazione di ponti disolfuro, clivaggio autocatalitico e elaborazione da zimogeno a proteasi serinica attiva.
• L'espressione tissutale è più elevata nei fluidi (latte, liquido cerebrospinale) e nei tessuti ghiandolari (ghiandole salivari, polmone, colon, mammella, rene) e rilevata nella sostanza grigia cerebrale; non è trovata in diversi altri tessuti inclusi pelle, milza, fegato e pancreas.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno mira alla regione C-terminale (aa 100–C-terminus) del KLK6 umano, che potrebbe riconoscere sia le forme zimogeniche che quelle attive. Confermare la specificità con controlli appropriati (proteina ricombinante, lisati knockdown/knockout).
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di ~26 kDa; la glicosilazione può causare una banda apparente più alta. Utilizzare controlli positivi (latte umano o liquido cerebrospinale) e considerare condizioni riducenti per rompere i ponti disolfuro.
• Per l'ELISA, ottimizzare l'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo. L'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento nell'ELISA a sandwich; valutare la reattività crociata con altre callicreine.
• KLK6 è secreta; testare i supernatanti delle colture cellulari o i fluidi biologici (CSF, latte) insieme ai lisati. Minimizzare i cicli di congelamento-scongelamento per preservare l'integrità delle proteine.

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