Anticorpo policlonale anti-KLKB1 di coniglio per WB, IHC-P, ELISA - P03952

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di KLKB1

• KLKB1 codifica per la precalicreina plasmatica, lo zimogeno della calicreina plasmatica, una proteasi serinica che circola nel sangue come precursore inattivo.
• Dopo l'attivazione, la calicreina plasmatica partecipa all'attivazione della coagulazione del sangue dipendente dalla superficie attivando reciprocamente il fattore XII della coagulazione (FXII) dopo essersi legata a superfici caricate negativamente.
• Libera il peptide vasoattivo bradichinina dal chininogeno ad alto peso molecolare (HMWK), collegando il sistema di attivazione del contatto all'infiammazione e alla permeabilità vascolare.
• La calicreina plasmatica può anche contribuire al sistema renina-angiotensina convertendo la prorenina in renina attiva.
• La localizzazione subcellulare è esclusivamente extracellulare; la proteina viene secreta nel plasma, dove si trova normalmente.
• La proteina contiene un peptide segnale, domini Apple multipli per le interazioni proteina-proteina e un dominio proteasi serinica di tipo tripsina; è N-glicosilata e stabilizzata da legami disolfuro.
• Le varianti genetiche in KLKB1 sono associate alla carenza di precalicreina (tratto di Fletcher), una condizione rara con tempo di tromboplastina parziale attivata prolungato ma tipicamente senza tendenza al sanguinamento.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 20–300 della catena pesante, che contiene i quattro domini Apple responsabili del legame con HMWK e le superfici caricate negativamente; questa regione è altamente conservata nell'uomo, topo e ratto, supportando la reattività crociata osservata.
• Per il Western blot, può essere rilevata una banda vicino a 71 kDa (precalicreina) o ~85 kDa (forma completa con glicosilazione); si consiglia la riduzione con DTT/TCEP per risolvere le catene legate da disolfuro.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), considerare il recupero dell'antigene con tampone citrato (pH 6.0) e un sistema di rilevamento sensibile per anticorpi primari di coniglio; si consiglia l'uso di siero pre-immune o controlli con peptide di blocco per confermare la specificità.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento; tuttavia, l'abbinamento con un anticorpo monoclonale verso un epitopo distinto può migliorare la sensibilità e la specificità.
• Dato che la calicreina plasmatica è abbondante nel sangue, la pre-adsorbimento dell'anticorpo policlonale contro proteine sieriche di topo/ratto immobilizzate può ridurre il rumore di fondo nelle applicazioni su tessuti di roditori se si osserva un legame aspecifico.
• Validare le prestazioni nel tuo specifico tipo di campione (plasma, siero, lisato tissutale) includendo controlli positivi (es. calicreina plasmatica purificata o plasma attivato) e controlli negativi (plasma depleto di KLKB1 o linee cellulari knockout se disponibili).

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