Anticorpo policlonale anti-Klotho per WB ed ELISA - Q9UEF7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di Klotho

• Klotho (KL) è una proteina di membrana di tipo I a singolo passaggio, codificata dal gene KL nell'uomo, ed esiste anche come peptide secreto generato da un clivaggio proteolitico.
• Presenta attività di beta-glucuronidasi, essendo in grado di idrolizzare beta-D-glucuronidi steroidei quali estradiolo-3-beta-D-glucuronide, estrone-3-beta-D-glucuronide ed estriolo-3-beta-D-glucuronide.
• Klotho agisce come corecettore obbligato per FGF23, essenziale per il legame del fattore di crescita dei fibroblasti 23 (FGF23) a FGFR1 e per la regolazione da parte di FGF23 del metabolismo renale della vitamina D e del riassorbimento del fosfato.
• Il dominio ectodominante solubile di Klotho, liberato per distacco, funziona come ormone circolante anti-invecchiamento che può prolungare la durata della vita inibendo la segnalazione dell'insulina/IGF1.
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana cellulare apicale (isoforma legata alla membrana) e la secrezione (isoforma solubile), consentendo funzioni autocrine, paracrine ed endocrine.
• L'espressione tissutale è più elevata nel rene, nella placenta, nell'intestino tenue e nella prostata; Klotho solubile è presente nel siero e nel liquido cerebrospinale ed è downregolata in alcuni tumori e nella malattia renale cronica.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione e la proteina è classificata tra le famiglie delle glicosidasi, degli ormoni e delle idrolasi.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato comprende la regione N-terminale (aa 1–200) della Klotho umana, comune sia alle isoforme di membrana sia a quelle secrete; tenere conto di questo aspetto nella progettazione dei saggi di rilevazione.
• Per il Western blot (WB), Klotho migra intorno a 116 kDa; includere controlli positivi costituiti da lisati di rene, placenta o prostata (umani, murini o di ratto), poiché questi tessuti esprimono la proteina.
• Durante l'esecuzione dell'ELISA, convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando la proteina Klotho ricombinante o fluidi biologici in cui Klotho solubile è abbondante, come il siero o il liquido cerebrospinale.
• È prevista una reattività crociata con la Klotho di topo e ratto; tuttavia, si raccomandano l'allineamento delle sequenze e test preliminari per confermare una reattività simile in queste specie.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e le condizioni di rilevazione per ogni applicazione; le diluizioni iniziali tipiche devono essere determinate empiricamente.

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