Anticorpo monoclonale di coniglio anti-KRAS+HRAS+NRAS per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P01111/P01112/P01116

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di KRAS+HRAS+NRAS

• NRAS funge da trasduttore di segnale nella via di segnalazione RAS-MAPK, regolando la proliferazione e la sopravvivenza cellulare mediante il legame ciclico di GDP/GTP e l’attività GTPasica intrinseca (PubMed:30712867).
  Riferimenti correlati: PMID:30712867
• KRAS, HRAS e NRAS condividono un’elevata similarità di sequenza, in particolare nel dominio N-terminale (aa 1-100), che corrisponde alla regione immunogena, consentendo a questo anticorpo di rilevare tutte e tre le isoforme.
• Le mutazioni oncogeniche di NRAS (comunemente ai codoni 12, 13 e 61) sono frequenti nei tumori umani e l’anticorpo riconosce sia le forme wild-type sia quelle mutanti, risultando utile per la ricerca oncologica.
• NRAS si localizza principalmente alla membrana plasmatica e all’apparato di Golgi, dove media eventi di segnalazione in questi siti.
• Le modifiche post-traduzionali, come prenilazione e palmitoilazione, sono critiche per il targeting alla membrana e l’attività biologica di NRAS.
• La ligasi E3 ubiquitinica LZTR1 media l’ubiquitinazione di NRAS, portando alla degradazione proteasomale e fungendo da meccanismo regolatorio (PubMed:40934300).
  Riferimenti correlati: PMID:40934300

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L’immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 1-100 di Ras umano (P01111), una regione conservata tra KRAS, HRAS e NRAS. Se necessario, considerare la validazione della specificità mediante linee cellulari con knockdown o knockout isoforma-specifici.
• Per il western blotting (WB), in condizioni riducenti è attesa una banda intorno a 21 kDa. Includere controlli di caricamento appropriati e considerare l’uso di tampone di lisi RIPA per un’estrazione efficace di Ras associato alla membrana.
• In immunofluorescenza (IF/ICC), le proteine Ras si osservano tipicamente a livello della membrana plasmatica e del Golgi; è necessaria la permeabilizzazione. Non è attesa una colorazione nucleare.
• Per l’immunoprecipitazione (IP), utilizzare tamponi di lisi ottimizzati contenenti detergenti non ionici e inibitori di proteasi/fosfatasi per preservare le interazioni proteina-proteina. Il pre-clearing e la titolazione dell’anticorpo possono migliorare la specificità.
• Le prestazioni in ELISA devono essere valutate con proteina Ras ricombinante o lisati cellulari; il limite di rilevazione dipenderà dal formato del saggio e dal sistema di detection utilizzato.

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