Anticorpo policlonale coniglio anti-LC3A/LC3B per WB - Q9GZQ8/Q9H492

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di LC3A/LC3B

• La proteina 1 associata ai microtubuli catena leggera 3 beta (LC3B, nota anche come ATG8F) è un modificatore simile all'ubiquitina che svolge un ruolo centrale nell'autofagia, specificamente nella formazione di vacuoli autofagosomici (autofagosomi). Riferimenti correlati: PMID:20418806, PMID:23209295, PMID:28017329
• LC3B è critica per la mitofagia, un processo di autofagia selettiva che rimuove i mitocondri danneggiati; a seguito della fissione mitocondriale e dello stress cellulare, LC3B si lega alle ceramidi C-18 per ancorare gli autofagolisosomi alle membrane mitocondriali esterne. Riferimenti correlati: PMID:23209295, PMID:28017329, PMID:22922758
• LC3B promuove la ciliogenesi primaria rimuovendo OFD1 dai satelliti centriolari tramite la via autofagica. Riferimenti correlati: PMID:24089205
• Attraverso l'interazione con il recettore della reticulofagia TEX264, LC3B partecipa al rimodellamento del reticolo endoplasmatico in autofagosomi durante lo stress da nutrienti, che successivamente si fondono con i lisosomi per il riciclaggio del RE. Riferimenti correlati: PMID:31006537, PMID:31006538
• In caso di stress da nutrienti, LC3B recluta direttamente il fattore di nucleazione dell'actina JMY sulle superfici della membrana del forofago, promuovendo la nucleazione dell'actina e la biogenesi degli autofagosomi. Riferimenti correlati: PMID:30420355
• A livello subcellulare, LC3B si trova sulle membrane degli autofagosomi, sulle vescicole citoplasmatiche, sul sistema endomembranare, sulle membrane mitocondriali e sul citoscheletro.
• LC3B è espressa più abbondantemente nel cuore, nel cervello, nel muscolo scheletrico e nei testicoli, con poca espressione nel fegato.
• LC3B è classificata sotto la via dell'autofagia e della coniugazione simile all'ubiquitina; esiste come lipoproteina e fosfoproteina, evidenziando le sue modifiche regolatorie. Questo anticorpo riconosce anche LC3A (MAP1LC3A), un paralogo strettamente correlato con funzioni conservate nell'autofagia.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico derivato dall'estremità N-terminale (aa 1-60) della LC3A umana, una regione altamente conservata con LC3B. Ci si aspetta una reattività crociata con entrambe le forme LC3A e LC3B a causa dell'omologia di sequenza.
• Nel Western blotting, possono essere rilevate sia la forma non lipidata (LC3-I) che quella lipidata (LC3-II); LC3-II migra leggermente più in basso (~14-16 kDa) su SDS-PAGE. Eseguire controlli appropriati (es. induzione dell'autofagia per digiuno o inibitori) per distinguere le forme.
• Per le applicazioni di immunofluorescenza, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione, poiché LC3 spesso decora le strutture autofagiche (puncta). La colorazione concomitante con marcatori lisosomiali può aiutare a confermare il flusso autofagico.
• Nell'immunoistochimica, potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene a causa della localizzazione dell'epitopo. Validare la specificità dell'anticorpo utilizzando knockdown con si/shRNA o peptide di blocco ove possibile.

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