Anticorpo policlonale rabbit anti-LCK per WB, IHC-P, ELISA - P06239

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di LCK

• LCK è una tirosin-chinasi specifica dei linfociti di 56 kDa (p56lck) e un membro della famiglia Src. Contiene domini SH2 e SH3 ed è ancorato alla membrana plasmatica tramite miristoilazione e palmitoilazione N-terminale.
• LCK è associato costitutivamente alle code citoplasmatiche dei corecettori CD4 e CD8. Dopo l'engagement del TCR, LCK viene reclutato nel complesso TCR-CD3, dove fosforila i residui di tirosina all'interno degli ITAM delle catene CD3 e TCRζ, avviando la segnalazione a valle. Riferimenti correlati: PMID:2470098, PMID:40592325
• Questa chinasi fosforila e attiva ZAP70, portando all'attivazione dei linfociti e alla produzione di linfochine. LCK partecipa anche alla segnalazione del recettore IL-2 e fosforila altri substrati tra cui RUNX3, PTK2B e RHOH. Riferimenti correlati: PMID:2470098
• LCK è espresso specificamente nelle cellule linfoidi ed è presente durante tutto lo sviluppo dei timociti, regolando entrambi i checkpoint di maturazione del pre-TCR e del TCR αβ maturo.
• Subcellolarmente, LCK si localizza sul lato citoplasmatico della membrana cellulare e nel citosol, dove è pronto per interagire con i recettori di superficie.
• Le modifiche post-traduzionali includono ancoraggi lipidici N-terminali (miristato e palmitato), molteplici eventi di fosforilazione (autofosforilazione alla Tyr394 e fosforilazione inibitoria alla Tyr505 da parte di CSK) e ubiquitinazione. Lo splicing alternativo produce isoforme.
• LCK è implicato in patologie; i riarrangiamenti cromosomici che coinvolgono LCK sono associati ai linfomi a cellule T, e le mutazioni germinali possono causare immunodeficienza combinata grave. Proteine virali come Nef di HIV-1 bersagliano LCK per modulare la funzione delle cellule T.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno (aa 1-240) copre i domini unici N-terminale e SH3, che sono meno conservati tra i membri della famiglia Src; questo progetto può aumentare la specificità per LCK.
• Per la WB, è attesa una banda di circa 56-58 kDa nei lisati di cellule linfoidi (es. Jurkat, PBMC umane, splenociti di topo). Ottimizzare la preparazione dei campioni e la diluizione dell'anticorpo per il proprio sistema sperimentale.
• Per IHC-P, può essere necessario il recupero dell'antigene; i tessuti di controllo positivo includono il timo umano o il linfonodo. Validare la colorazione nei campioni sperimentali pertinenti.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con LCK di topo e ratto; se si utilizzano altre specie, verificare la reattività in modo indipendente.
• Essendo un anticorpo policlonale, è necessario valutare la coerenza tra lotti; è adatto per applicazioni ELISA se abbinato a anticorpi secondari appropriati.

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