Anticorpo monoclonale di coniglio anti-LRRK2 per WB, ELISA - Q5S007

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di LRRK2

• LRRK2 (Serina/treonina-proteina chinasi 2 a ripetizioni ricche di leucina), nota anche come Dardarina o PARK8, è una grande proteina multidominio che possiede sia attività di serina/treonina chinasi che di GTPasi; la funzione GTPasi tramite il dominio Roc regola la sua attività chinasi. Riferimenti correlati: PMID:18230735, PMID:26824392, PMID:28720718
• Questa chinasi fosforila un'ampia gamma di substrati coinvolti in processi cellulari critici, tra cui plasticità neuronale, immunità innata, autofagia e traffico di vescicole. Riferimenti correlati: PMID:17114044, PMID:20949042, PMID:21850687
• LRRK2 è un regolatore principale delle GTPasi RAB; fosforila più membri della famiglia RAB (RAB3, RAB5, RAB8, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43), controllando così il loro scambio GDP/GTP e le interazioni con gli effetori. Riferimenti correlati: PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718
• LRRK2 regola positivamente l'autofagia tramite un meccanismo dipendente dal calcio che attiva la via di segnalazione CaMKK/AMPK, che coinvolge il rilascio di calcio lisosomiale. Riferimenti correlati: PMID:22012985
• Nei neuroni, LRRK2 modula la morfologia dei processi, il traffico di vescicole sinaptiche e la ciliogenesi primaria; fosforila RAB8A e RAB10 per promuovere la segnalazione di sonic hedgehog (SHH) nel cervello. Riferimenti correlati: PMID:17114044, PMID:24687852, PMID:29125462, PMID:30398148
• Le mutazioni nel gene LRRK2 sono la causa genetica più comune della malattia di Parkinson familiare (PARK8) e contribuiscono anche ai casi sporadici.
• Subcellularmente, LRRK2 si localizza in numerosi compartimenti membranosi tra cui l'apparato di Golgi, il reticolo endoplasmatico, gli endosomi, i lisosomi, i mitocondri e le vescicole sinaptiche; si trova anche nel citosol e associata al citoscheletro.
• LRRK2 è ampiamente espressa, con alti livelli nel cervello, cuore e fegato; nel sistema nervoso centrale è particolarmente abbondante nelle aree dopaminoceettive e nei neuroni piramidali corticali.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 100–340 della LRRK2 umana, una regione N-terminale; nella progettazione dei saggi di rilevazione, tenere conto dell'accessibilità dell'epitopo in condizioni native rispetto a condizioni denaturanti.
• Per il Western blotting, utilizzare gel di SDS-PAGE a bassa percentuale e tempi di trasferimento prolungati adatti a proteine di alto peso molecolare (~286 kDa).
• Nelle applicazioni ELISA, validare la rilevazione utilizzando proteina LRRK2 ricombinante o lisati di linee cellulari che esprimono il bersaglio in modo endogeno.
• La reattività crociata è confermata per l'uomo; per altre specie, valutare l'omologia di sequenza della regione dell'immunogeno ed eseguire un esperimento pilota.

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