Anticorpo policlonale rabbit anti-LRRK2 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q5S007

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di LRRK2

• LRRK2 è una serina/treonina proteina chinasi a più domini di grandi dimensioni che fosforila un'ampia gamma di substrati, svolgendo ruoli critici nella plasticità neuronale, nell'immunità innata, nell'autofagia e nel traffico di vescicole. Riferimenti correlati: PMID:17114044 PMID:20949042 PMID:21850687

• Agisce come regolatore chiave delle GTPasi RAB, controllando il loro scambio GTP/GDP e le interazioni proteiche attraverso la fosforilazione di più RAB, tra cui RAB3A-D, RAB5A-C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35 e RAB43. Riferimenti correlati: PMID:23395371 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:29125462

• LRRK2 regola la ciliogenesi primaria e la segnalazione di sonic hedgehog (SHH) nel cervello tramite la fosforilazione di RAB8A e RAB10 e, insieme a RAB29, media il traffico retrogrado dipendente dal retromero tra lisosomi e Golgi. Riferimenti correlati: PMID:23395371 PMID:29125462 PMID:30398148

• Oltre all'attività chinasica, LRRK2 possiede funzione GTPasi tramite il suo dominio Roc, che regola reciprocamente l'attività chinasica, e viene reclutata da RAB29 ai lisosomi sovraccaricati per promuovere il rilascio del contenuto lisosomiale e sopprimere l'ingrossamento tramite gli effettori EHBP1/EHBP1L1. Riferimenti correlati: PMID:18230735 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:30209220 PMID:38227290

• LRRK2 regola positivamente l'autofagia tramite una via CaMKK/AMPK dipendente dal calcio, che coinvolge l'attivazione del recettore NAADP, l'aumento del pH lisosomiale e il rilascio di calcio. Riferimenti correlati: PMID:22012985

• Modula l'immunità innata potenziando l'attivazione di RIPK2 a valle di NOD1/NOD2 e, indipendentemente dall'attività chinasica, inibisce la degradazione proteasomiale di MAPT (tau), promuovendone l'oligomerizzazione e la secrezione. Riferimenti correlati: PMID:27830463 PMID:26014385

• LRRK2 si localizza in più compartimenti subcellulari tra cui vescicole citoplasmatiche, Golgi, RE, mitocondri, endosomi, lisosomi e vescicole sinaptiche; è ampiamente espressa nel cervello, cuore, fegato e altri tessuti.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 750–910 della LRRK2 umana, una regione N-terminale al dominio a ripetizioni di leucina; l'anticorpo policlonale ottenuto può riconoscere più epitopi e potrebbe essere adatto per rilevare diverse isoforme o prodotti di clivaggio.
• Per Western blot, tenere conto dell'alto peso molecolare di LRRK2 (~286 kDa); utilizzare un gel di poliacrilammide a bassa percentuale (es. 6–8%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento (es. trasferimento umido prolungato) per garantire una trasferimento efficiente.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), i metodi di recupero dell'antigene (indotti dal calore o enzimatici) possono migliorare la rilevazione; validare l'anticorpo nel tuo tessuto specifico e nelle tue condizioni di fissazione.
• L'immunofluorescenza/immuncitochimica (IF/ICC) può richiedere permeabilizzazione e fissazione accurata per preservare l'accessibilità dell'epitopo; la co-colorazione con marcatori di organelli può aiutare a confermare i modelli di localizzazione.
• ELISA: l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; valutare l'abbinamento con un clone di anticorpo anti-LRRK2 validato per lo sviluppo di ELISA sandwich.

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